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本发明公开了抗CD123的纳米抗体、嵌合抗原受体及其应用,所述纳米抗体为VHH01、VHH02,所述纳米抗体VHH01、VHH02与CD123均具有较好的亲和力和专属性,基于所述纳米抗体VHH01、VHH02构建得到的嵌合抗原受体、嵌合抗原受体免疫细胞对CD123阳性细胞均具有显著的细胞毒性,在肿瘤治疗领域具有广泛的应用前景。