降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113621063A(43)申请公布日2021.11.09(21)申请号202110882251.7(22)申请日2021.08.02(71)申请人江苏荃信生物医药有限公司地址225300江苏省泰州市陆家路西侧、滨河路北侧疫苗工程中心B304申请人江苏赛孚士生物技术有限公司(72)发明人戴长松李帅郭斌黄文俊戴璐裘浙伟王逸尘何永梅吴亦亮(74)专利代理机构北京唐颂永信知识产权代理有限公司11755代理人刘伟任玮静(51)Int.Cl.C07K16/28(2006.01)C07K1/22(2006.01)权利要求书2页说明书12页序列表7页附图2页(54)发明名称降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法(57)摘要本发明公开了一种降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法，所述方法包括下述步骤：使用第一平衡缓冲液平衡亲和层析介质得到平衡好的亲和层析介质，并将单克隆抗体发酵液与所述平衡好的亲和层析介质结合；然后进行中间预洗脱淋洗，接着进行终洗脱以除去宿主细胞蛋白得到单克隆抗体；所述单克隆抗体为分离的抗人干扰素α受体1(IFNAR1)单克隆抗体，其包含三个重链互补决定区(CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3)和三个轻链互补决定区(CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3)。所述方法简单易行，能够进行放大纯化生产，细胞发酵上清液无需进行前预处理，洗脱样品得率较高，同时HCP残留量也保持在较低水平(残留控制量不高于0.1％)，从而减轻之后纯化步骤中去除HCP的压力。CN113621063ACN113621063A权利要求书1/2页1.一种降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法，其包括下述步骤：使用第一平衡缓冲液平衡亲和层析介质得到平衡好的亲和层析介质，并将单克隆抗体发酵液与所述平衡好的亲和层析介质结合；然后进行中间预洗脱淋洗，接着进行终洗脱以除去宿主细胞蛋白得到单克隆抗体；所述单克隆抗体为分离的抗人干扰素α受体1(IFNAR1)单克隆抗体，其包含三个重链互补决定区(CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3)和三个轻链互补决定区(CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3)，其中：(a)CDR‑H1的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；(b)CDR‑H2的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示；(c)CDR‑H3的氨基酸序列如SEQIDNO：3所示；(d)CDR‑L1的氨基酸序列如SEQIDNO：4所示；(e)CDR‑L2的氨基酸序列如SEQIDNO：5所示；且(f)CDR‑L3的氨基酸序列如SEQIDNO：6所示。2.根据权利要求1所述的亲和纯化方法，其中，所述抗人干扰素α受体1(IFNAR1)单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：7所示；且，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：8所示。3.根据权利要求2所述的亲和纯化方法，其中，所述抗人干扰素α受体1(IFNAR1)单克隆抗体的重链的氨基酸序列如SEQIDNO：10所示；轻链的氨基酸序列如SEQIDNO：11所示。4.根据权利要求1‑3中任一项所述的亲和纯化方法，其中，所述亲和层析介质为配基交联到琼脂糖、聚乙烯醚、羟基化聚醚树脂、聚丙烯酸树脂、聚苯乙烯二乙烯苯基树脂、聚甲基丙烯酸树脂、聚苯乙烯树脂、羟基磷灰石或玻璃基质上的层析介质，优选的，所述亲和层析介质为配基交联到聚乙烯醚的层析介质；优选的，所述配基为ProteinA、ProteinG或ProteinL，优选为ProteinA。5.根据权利要求1‑4中任一项所述的亲和纯化方法，其中，所述第一平衡缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris‑HCl缓冲液或硼酸‑硼砂缓冲液，所述第一平衡缓冲液中的盐浓度为5mM‑0.25M，pH为5.5‑8.0。6.根据权利要求1‑5中任一项所述的亲和纯化方法，其中，中间预洗脱缓冲液为中性缓冲液和/酸性缓冲液；优选的，所述中性缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液或甘氨酸缓冲液；所述酸性缓冲液为柠檬酸‑磷酸氢二钠缓冲液、醋酸‑醋酸钠缓冲液或柠檬酸‑柠檬酸三钠缓冲液；优选的，所述中间预洗脱缓冲液的pH为5.0‑7.5。7.根据权利要求6所述的亲和纯化方法，其中，在所述中间预洗脱缓冲液中加入预洗脱活性剂，优选的，所述预洗脱活性剂为盐酸胍、聚山梨酯80或氯化钠，进一步优选的，所述预洗脱活性剂为盐酸胍。8.根据权利要求7所述的亲和纯化方法，其中，所述盐酸胍的浓度为0.01‑1M。9.根据权利要求1‑8中任一项所述的亲和纯化方法，其中，在中间预洗脱淋洗后，在进行终洗脱之前还包括下述步骤：使用第二平衡缓冲液进行平衡，优选的，所述第二平衡缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tri