在亲和层析中减少宿主细胞蛋白的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107835819A(43)申请公布日2018.03.23(21)申请号201680041446.6(74)专利代理机构北京市中咨律师事务所1(22)申请日2016.08.111247代理人柴云峰黄革生(30)优先权数据15181903.42015.08.21EP(51)Int.Cl.C07K16/06(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2018.01.15(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2016/0691632016.08.11(87)PCT国际申请的公布数据WO2017/032611EN2017.03.02(71)申请人豪夫迈·罗氏有限公司地址瑞士巴塞尔(72)发明人R·法尔肯施泰因W·克恩莱因K·施万德纳B·斯彭斯伯格权利要求书1页说明书33页序列表7页(54)发明名称在亲和层析中减少宿主细胞蛋白的方法(57)摘要本文报道了一种生产人IgG4或IgG1同种型抗体的方法，包括以下步骤a)培养包含编码人IgG4或IgG1同种型抗体的核酸的细胞，b)从细胞或培养基中回收人IgG4或IgG1同种型抗体，c)使人IgG4或IgG1同种型抗体与蛋白A层析材料接触，d)用包含组氨酸和Tris的水溶液洗涤蛋白A层析材料，e)从蛋白A层析材料中回收人IgG4或IgG1同种型抗体，从而产生人IgG4或IgG1同种型抗体。CN107835819ACN107835819A权利要求书1/1页1.包含组氨酸和Tris的水溶液在蛋白A层析的洗涤步骤中用于降低宿主细胞蛋白质的含量的用途，其中蛋白A层析用于纯化人IgG4或IgG1同种型抗体，其中所述水溶液具有约6.5或更高的pH。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述水溶液包含约10mM至约1000mM组氨酸。3.根据权利要求1至2中任一项的用途，其中所述水溶液包含约200mM组氨酸。4.根据权利要求1至3中任一项的用途，其中所述水溶液包含约100mM至约1500mMTris。5.根据权利要求1至4中任一项的用途，其中所述水溶液包含约200mM组氨酸和约1000mMTris。6.根据权利要求1至5中任一项的用途，其中所述宿主细胞蛋白是磷脂酶B样2(PLBL2)或簇蛋白。7.根据权利要求1至6中任一项的用途，其中所述蛋白A层析另外包含用低电导率水溶液的洗涤步骤。8.根据权利要求7所述的用途，其中所述低电导率水溶液具有约0.5mS/cm或更小的电导率值。9.根据权利要求7至8中任一项的用途，其中所述低电导率水溶液包含约0.1至约8mMTris。10.根据权利要求7所述的用途，其中所述低电导率水溶液包含约0.05至约2mM磷酸钾。11.根据权利要求7至10中任一项的用途，其中所述低电导率水溶液具有约7或更高的pH。12.根据权利要求1至11中任一项的用途，其中所述人IgG4同种型抗体是针对P-选择蛋白的抗体或针对因子IXa和因子X的抗体。13.根据权利要求1至11中任一项的用途，其中所述人IgG1同种型抗体是针对β淀粉状蛋白的抗体或针对Her2的抗体或针对Ang2和VEGF-A的抗体或针对癌胚抗原(CEA)和CD3的抗体。14.生产人IgG4或IgG1同种型抗体的方法，包括以下步骤a)培养包含编码人IgG4或IgG1同种型抗体的核酸的细胞，b)从细胞或培养基中回收人IgG4或IgG1同种型抗体，c)使人IgG4或IgG1同种型抗体与蛋白A层析材料接触，d)用pH约6.5或更高的包含组氨酸和Tris的水溶液洗涤蛋白A层析材料，e)从蛋白A层析材料中回收人IgG4或IgG1同种型抗体，从而产生人IgG4或IgG1同种型抗体。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述水溶液包含约200mM组氨酸。16.根据权利要求14至15中任一项的方法，其中所述水溶液包含约200mM组氨酸和约1MTris。17.根据权利要求14至16中任一项的方法，其中所述蛋白A层析还包括使用具有0.5mS/cm或更小的电导率值的低电导率水溶液的洗涤步骤。18.根据权利要求14至17中任一项的方法，其中所述宿主细胞蛋白质是磷脂酶B样2(PLBL2)或簇蛋白。2CN107835819A说明书1/33页在亲和层析中减少宿主细胞蛋白的方法[0001]本发明一般涉及多肽纯化领域。本发明具体涉及在含有抗体的溶液中减少宿主细胞蛋白如磷脂酶B样2(PLBL2)或簇蛋白(Clusterin)。背景技术[0002]蛋白质，特别是免疫球蛋白在当今的医疗序列产品中起着重要的作用。对于人类应用，每种治疗蛋白质必须满足不同的标准。为了确保生物制药剂对人体的安全性，在生产过程中积累的副产物必须被特别去除。为了满足监管规范，制造过程后必须进行一个或多个纯化步骤。除此之