含有猪瘟E2和圆环病毒的Cap的重组蛋白及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114230677A(43)申请公布日2022.03.25(21)申请号202210164172.7A61K39/187(2006.01)(22)申请日2022.02.23A61K39/12(2006.01)A61P31/14(2006.01)(71)申请人北京中海生物科技有限公司A61P31/20(2006.01)地址100081北京市海淀区中关村南大街8号中国兽医药品监察所老办公楼二层(72)发明人伏显华(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/85(2006.01)C12N5/10(2006.01)A61K39/295(2006.01)权利要求书1页说明书12页序列表11页附图8页(54)发明名称含有猪瘟E2和圆环病毒的Cap的重组蛋白及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了含有猪瘟E2和圆环病毒的Cap的重组蛋白及其制备方法和应用，属于疫苗领域。本发明公开的疫苗活性成分为重组蛋白，所述重组蛋白由融合蛋白CSFVE2‑SpyCatcher和Cap‑SpyTag连接而成，所述融合蛋白CSFVE2‑SpyCatcher是氨基酸序列是SEQIDNo.2的蛋白质；所述融合蛋白Cap‑SpyTag为氨基酸序列是SEQIDNo.3的蛋白质。本发明还提供了在CHO细胞株中共表达猪瘟E2的构建方法，利用圆环VLPs展示E2，达到E2VLPs化，可以提高E2抗原免疫原性，达到相互刺激免疫，提高猪瘟和圆环免疫保护效果。本发明改善了猪瘟E2蛋白质在哺乳细胞中表达产物免疫效果差和猪瘟E2蛋白质在原核表达系统的表达产物免疫猪后使猪产生抗体时间短以及原核内毒素残留引起免疫死亡的缺陷。CN114230677ACN114230677A权利要求书1/1页1.蛋白质，其特征在于：所述蛋白质由融合蛋白CSFVE2‑SpyCatcher和融合蛋白Cap‑SpyTag连接而成，所述融合蛋白CSFVE2‑SpyCatcher为下述A1)‑A3)中任一种：A1)氨基酸序列是SEQIDNo.2的蛋白质；A2)A1)所示的氨基酸序列经过一个以上氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有80％以上的同一性且与猪瘟病毒疫苗相关的蛋白质；A3)在A1)或A2)的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；所述融合蛋白Cap‑SpyTag为下述B1)‑B3)中任一种：B1)氨基酸序列是SEQIDNo.3的蛋白质；B2)B1)所示的氨基酸序列经过一个以上氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与B1)所示的蛋白质具有80％以上的同一性且与猪瘟病毒疫苗相关的蛋白质；B3)在B1)或B2)的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质。2.核酸分子，其特征在于：所述核酸分子由编码所述融合蛋白CSFVE2‑SpyCatcher的核酸分子和编码所述融合蛋白Cap‑SpyTag的核酸分子组成，所述编码融合蛋白CSFVE2‑SpyCatcher的核酸分子为下述g11)‑g13)中任一种，g11)编码链的编码序列是SEQIDNo.1第5776‑7266位核苷酸所示的DNA分子；g12)编码链的核苷酸序列是SEQIDNo.1第5776‑7266位所示的DNA分子；g13)与g11)或g12)限定的核苷酸序列具有80％或80％以上同一性，且编码权利要求1中所述融合蛋白CSFVE2‑SpyCatcher的DNA分子；所述编码融合蛋白Cap‑SpyTag的核酸分子为下述g21)‑g23)中任一种，g21)编码链的编码序列是SEQIDNo.1第9337‑10029位核苷酸所示的DNA分子；g22)编码链的核苷酸序列是SEQIDNo.1第9337‑10029位所示的DNA分子；g23)与g21)或g22)限定的核苷酸序列具有80％或80％以上同一性，且编码权利要求1中所述融合蛋白Cap‑SpyTag的DNA分子。3.表达盒，其特征在于：所述表达盒含有权利要求2所述的核酸分子。4.重组载体，其特征在于：所述重组载体含有权利要求2所述的核酸分子或含有权利要求3所述的表达盒。5.重组微生物，其特征在于：所述重组微生物含有权利含有权利要求2所述的核酸分子或含有权利要求3所述的表达盒或含有权利要求4所述的重组载体。6.重组转基因细胞系，其特征在于：所述重组转基因细胞系含有权利含有权利要求2所述的核酸分子或含有权利要求3所述的表达盒或含有权利要求4所述的重组载体。7.猪瘟疫苗，其包含权利要求1所述的蛋白质。8.权利要求1所述蛋白质的制备方法，包括：使权利要求1中所述融合蛋白CSFVE2‑Sp