同型半胱氨酸检测试剂盒方法学评价.docx

同型半胱氨酸检测试剂盒方法学评价[摘要]目的：通过对同型半胱氨酸（Hcy）检测试剂盒（酶比色法）各种性能的测定评价Hcy酶比色法检测的可靠性。方法：用本方法在日立7080全自动生化分析仪上对精密度、线性范围和抗干扰指标进行评价。结果：本方法的测定评价表明该Hcy试剂盒批内变异系数为2.3%批间变异系数为5.5%线性良好r=0.9994。胆红素、乳糜（甘油三酯）和血红蛋白抗坏血酸对该试剂盒的测定结果无显著影响；抗坏血酸对该试剂盒的测定结果有一定影响但仍在执行标准规定的范围内。结论：本方法测定结果准确可靠且操作简便直接在全自动生化分析仪上使用值得推广。[关键词]同型半胱氨酸；体外诊断试剂；方法学评价[中图分类号]R446.1[文献标识码]B[文章编号]1673-7210（2011）04（a）-135-02血浆同型半胱氨酸（又称高半胱氨酸homocysteineHcy）是蛋氨酸代谢过程中的中间产物。同型半胱氨酸在体内的分解代谢受两方面因素影响最大。一是与先天遗传有关的某些生物酶的缺乏另一个就是体内叶酸、维生素B6、维生素B12等营养元素的缺乏。这两种缺乏都会影响同型半胱氨酸转化为其他物质导致高同型半胱氨酸血症。血浆Hcy的测定对心血管疾病、尿毒症、动脉粥样硬化、糖尿病、老年痴呆症等疾病的判定中有重要的临床意义[1]。通常认为成人空腹血浆总Hcy水平正常值为4~12μmol/L理想值为＜10μmol/L高于15μmol/L则被认为是高同型半胱氨酸败血症；老年人（≥60岁）空腹血浆总Hcy水平正常值为15~20μmol/L高于20μmol/L被认为是高同型半胱氨酸败血症[2]。目前实验室常用的Hcy测定方法有色谱法、酶联免疫法及荧光偏振免疫法。色谱法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点现在公认其为测定血浆Hcy浓度的首选方法但因色谱法（HPLC及GC-MS）需要的设备复杂且昂贵难以适应常规临床化学实验室应用而免疫测定法可以实现自动化且可测定大量标本因此受到临床广泛欢迎[3]。免疫测定法一般是通过ELISA法、荧光偏振免疫法和酶循环法进行检测[4]。本文是对一种在反应原理上有别于酶循环法但是同样可以在生化分析仪上进行检测的试剂盒进行考察。重庆本地某体外诊断试剂生产厂家自主研发的酶比色法的同型半胱氨酸检测试剂盒用二硫苏糖醇还原样本中的氧化型同型半胱氨酸再通过同型半胱氨酸甲基转移酶的作用将D-甲硫氨酸的甲基转移至同型半胱氨酸从而生成D-蛋氨酸、L-蛋氨酸。随后D-蛋氨酸在D-蛋氨酸氧化酶作用下生成氧化氢。过氧化物酶与显色剂10-（羟甲基氨羰基）-37-双（二甲氨基）吩噻嗪钠（简称DA-67）发生作用生成亚甲基蓝显色在660nm有最大吸收通过测定其吸光度变化值来计算出同型半胱氨酸的浓度。1仪器与材料日立7080全自动生化分析仪。评价试剂：同型半胱氨酸检测试剂盒（酶比色法）由重庆某体外诊断试剂生产厂家提供。同型半胱氨酸质控品北京九强公司生产（批号：08-0704）质控范围10.2~13.8μmol/L；批号（08-0926）质控范围24.6~33.4μmol/L。乳糜：西安立邦制药有限公司生产（批号：0803112）；血红蛋白（牛血红蛋白）：北京经科宏达生物公司（批号：SigmaH-3760）；胆红素（BilirubinMixedIsoners）：北京经科宏达生物公司（批号：SigmaA-7631）。2方法与结果2.1操作方法试剂盒测定参数设置和操作严格按照试剂盒厂家说明书规定进行。2.2评价方法按产品执行标准及WS/T124-1999[5]对试剂的精密度、线性范围和抗干扰性进行评价。2.3精密度试验2.3.1批内变异系数取线性范围内一份定值血清重复测定10次测定批内CVCV=2.3%。2.3.2批间变异系数取有效期内3个不同批号的试剂分别对同一份定值血清进行3次重复测定。用3份试剂分别测量的平均值和总平均值计算批间相对极差批间相对极差=5.5%。2.4线性范围说明书规定线性范围为3~50μmol/L。分别取12.0、29.0μmol/L的质控品并用稀释或加倍的方法达到6.0μmol/L和55.4μmol/L作为线性范围测定的理论值。每个浓度测定3次取平均值与理论值进行回归计算r=0.9994。图1Hcy试剂盒线性试验2.5干扰试验在质控血中分别加入不同的干扰物质使其在血清中的浓度达到表1的要求然后测定Hcy的含量。试验结果表示