一种定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114908076A(43)申请公布日2022.08.16(21)申请号202111658154.6C12R1/19(2006.01)(22)申请日2021.12.31(71)申请人潍坊麦卡阿吉生物科技有限公司地址261505山东省潍坊市高密市夏庄镇高新一路158号(72)发明人杨志强李福利苏航公衍军(74)专利代理机构沈阳科苑专利商标代理有限公司21002专利代理师李颖(51)Int.Cl.C12N9/88(2006.01)C12N15/60(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N1/21(2006.01)C12P19/00(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表4页附图4页(54)发明名称一种定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶及其应用(57)摘要本发明涉及基因工程技术领域，具体的说是一种定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶及其应用。褐藻胶裂解酶的碱基序列如SEQIDNO.1中碱基序列所示。所述褐藻胶裂解酶在定向降解褐藻获得褐藻寡糖三糖中的应用。本发明利用来源于海洋嗜热菌Defluviitaleaphaphyphilasp.Alg1的褐藻胶裂解酶AL1761，通过生物酶解法降解获得的褐藻寡糖聚合度小于5，即褐藻寡糖三糖，进而在最大程度的保留了褐藻寡糖主要活性成分的同时，并将褐藻胶中的大分子转化为能被机体直接吸收的小分子，是环保、高效的加工工艺；本发明采用特定的酶定向获得褐藻寡糖三糖产物，本发明所述的褐藻胶裂解酶具有产物单一、酶活高、降解效率高的优点，具备良好的工业应用前景。CN114908076ACN114908076A权利要求书1/1页1.一种定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶，其特征在于：褐藻胶裂解酶的碱基序列如SEQIDNO.1中碱基序列所示。2.按权利要求1所述定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶，其特征在于：所述定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶的氨基酸序列如SEQIDNO.2中所示。3.一种权利要求2所述的定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶的应用，其特征在于：所述褐藻胶裂解酶在定向降解褐藻获得褐藻寡糖三糖中的应用。4.按权利要求3所述的定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶的应用，其特征在于：所述褐藻为海带、马尾藻、泡叶藻、昆布、巨藻、鼠尾藻中的一种或几种。5.一种重组表达载体，其特征在于，含有权利要求1所述的定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶的编码基因。6.一种重组宿主细胞，其特征在于，含有权利要求1所述的定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶。7.按权利要求5所述的重组宿主细胞，其特征在于，所述重组宿主细胞为大肠杆菌菌株BL21。8.一种定向酶解获得褐藻寡糖三糖的方法，其特征在于：以海藻酸钠为底物，添加含权利要求1所述定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶，在pH3‑9，温度40‑80℃下酶解获得褐藻寡糖三糖。9.按权利要求8所述的定向酶解获得褐藻寡糖三糖的方法，其特征在于：所述酶为权利要求1所述定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶或含权利要求1所述定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶的复合酶；其中，酶为权利要求1所述定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶时添加量为底物质量的0.5％‑2％；酶为混合酶时添加量为底物质量的2％‑5％。10.按权利要求9所述的定向酶解获得褐藻寡糖三糖的方法，其特征在于：所述混合酶为按2:2:1比例的权利要求1所述定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶、蛋白酶和果胶酶。2CN114908076A说明书1/8页一种定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶及其应用技术领域[0001]本发明涉及基因工程技术领域，具体的说是一种定向获得褐藻寡糖三糖产物的褐藻胶裂解酶及其应用。背景技术[0002]褐藻中的重要多糖成分重要包括褐藻酸、甘露醇和少部分的海带多糖，基本前两种物质能占70％左右。我国海带产地，北起辽宁(大连)、南至广东(南澳)，其中山东、福建是我国的海带主产地，占全国总产量的90％以上。[0003]褐藻胶的分子量非常大,一般为20～250kDa。褐藻胶具有较强的凝胶性,不容易通过机体所设置的屏障和细胞膜,很难被机体吸收,导致褐藻胶在活性应用方面受到了很大的限制。褐藻寡糖是将褐藻胶降解得到的一种低分子聚合物,褐藻寡糖有许多的生物活性功能,属于功能性寡糖。褐藻寡糖是海洋性寡糖的代表,它的结构较简单与内源性糖链中的结构有许多相似之处，作为基础的活性物质己经为大家所认知。褐藻胶降解为褐藻寡糖后,褐藻寡糖水溶性增强,从而易被机体吸收,同时还增强其生物活性,褐藻寡糖较褐藻胶生物活性更为突出,如促进植物生长、缓解植物胁迫、抗炎、抑菌、抗肿瘤及抗氧化等方面,应用前景广阔，由于褐藻寡