一种耐高温木聚糖酶突变体及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115029335A(43)申请公布日2022.09.09(21)申请号202210814339.X(22)申请日2022.07.12(71)申请人青岛蔚蓝生物集团有限公司地址266100山东省青岛市崂山区九水东路596-1号(72)发明人鲍锴李馨培吴秀秀(51)Int.Cl.C12N9/24(2006.01)C12N15/56(2006.01)C12N15/81(2006.01)C12N1/19(2006.01)A23K20/189(2016.01)C12R1/84(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表2页(54)发明名称一种耐高温木聚糖酶突变体及其应用(57)摘要本发明涉及基因工程与蛋白质改造技术领域，具体涉及一种耐高温木聚糖酶突变体及其应用。本发明以野生型木聚糖酶PT为基础，提供了包含T23S，S39D，T41N，S62Q，L64M，W116V，A139G，Y144F，T149F，N160E/V中至少一个突变位点的突变体。与野生型相比，在95℃条件下处理5min后，所述木聚糖酶单点突变体的酶活残留率提高了10.0%‑25.6%，耐热性显著增强；其中，含L64M单点突变的木聚糖酶突变体的耐热性最强，酶活残留率高达87.90%，有利于其在饲料领域的广泛应用。CN115029335ACN115029335A权利要求书1/1页1.一种木聚糖酶突变体，其特征在于，所述突变体包含与SEQIDNO:1具有至少90%同一性的氨基酸序列，且与SEQIDNO:1相比在选自下组中的至少一个位置上包含氨基酸的取代：23，39，41，62，64，116，139，144，149，160。2.如权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列与SEQIDNO:1相比具有至少91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，或至少99%的同一性。3.如权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列与SEQIDNO:1相比具有至少99.1%，99.2%，99.3%，99.4%，99.5%，99.6%，99.7%，99.8%，或至少99.9%的同一性。4.如权利要求1‑3任一所述的突变体，其特征在于，所述突变体包含下组中至少一个氨基酸的取代：T23S，S39D，T41N，S62Q，L64M，W116V，A139G，Y144F，T149F，N160E/V。5.编码权利要求1‑4任一所述木聚糖酶突变体的DNA分子。6.包含权利要求5所述DNA分子的重组表达质粒。7.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞包含权利要求6所述的重组表达质粒。8.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为毕赤酵母（Pichiapastoris）。9.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为里氏木霉（Trichodermareesei）。10.权利要求1‑4任一所述木聚糖酶突变体在饲料领域中的应用。2CN115029335A说明书1/6页一种耐高温木聚糖酶突变体及其应用技术领域[0001]本发明涉及基因工程和蛋白质工程技术领域，具体涉及一种耐高温木聚糖酶突变体及其应用。背景技术[0002]木聚糖是一种多聚五碳糖，其主要成分是D‑木糖，其主链是由β‑(1‑4)‑吡喃型D‑木糖单元通过β‑l,4‑糖苷键连接而成的多聚合物，大部分木聚糖是异型多糖，其主链常含有阿拉伯糖、香豆酸，等支链含有多种替代糖基，常见的有阿魏酸、糖醛酸等。因为木聚糖支链的残基与木质素、果胶、葡聚糖等连接的原因，所以木聚糖很难被降解。木聚糖在降解的过程中，木聚糖酶起到了重要作用，由于它能打开木聚糖的主链和支链，并将木聚糖分解为可发酵的低聚糖或者单糖，以利于生物的利用。[0003]木聚糖酶（endo‑1,4‑β‑D‑xylanxylanohydrolaseEC3.2.1.8）是一种水解酶，是指一类能将木聚糖降解为低聚木糖或木糖的复合酶系，通常包含内切酶和外切酶。一般所说的木聚糖酶即内切β‑1,4‑D‑木聚糖酶（EC3.2.1.8），主要作用于木聚糖的主链骨架的降解，水解产物主要为木二糖或木二糖以上的低聚糖，也有少量的木糖、阿拉伯糖和甘露糖，被认为是木聚糖降解过程中最为关键的酶之一。根据木聚糖酶作用pH的不同可以将木聚糖酶分为嗜酸性酶、嗜碱性酶和中性酶。也可根据对温度的不同而分为嗜热酶、中温酶和低温酶。[0004]木聚糖酶的来源非常广泛，目前已经发现的能产木聚糖酶的微生物将近有几十个属，一百多个种，包括细菌、真菌、放线菌以及某些酵母等。目前已经被报道的细菌有Butyrivibro、Clostridium；真菌类的有Penicillium、Trichoderma、Aspergillus等。