一种与绵羊多胸椎数相关的SNP分子标记及扩增引物组和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115725745A(43)申请公布日2023.03.03(21)申请号202211209542.0(22)申请日2022.09.30(71)申请人中国科学院遗传与发育生物学研究所地址100020北京市朝阳区北辰西路1号院2号(72)发明人刘秋月王海涛黄勋马润林(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师苏士莹(51)Int.Cl.C12Q1/6888(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称一种与绵羊多胸椎数相关的SNP分子标记及扩增引物组和应用(57)摘要本发明属于分子标记技术领域，具体涉及一种与绵羊多胸椎数相关的SNP分子标记及扩增引物组和应用。本发明所述绵羊多胸椎数性状的SNP分子标记含有位于绵羊第7号染色体上第82504715处(Oar_V4.0)多态性为T/A的核苷酸序列。用于检测绵羊ABCD4基因型的试剂盒，包括用于扩增所述的SNP分子标记引物对。SNP分子标记、引物对、试剂盒在检测绵羊ABCD4基因型或绵羊分子标记辅助育种中的应用。对ABCD4基因的SNP位点检测，将具有多胸椎数性状的TA基因型个体和AA基因型个体选留下来，从而提高绵羊的生产力，对绵羊大规模分子育种具有潜在的应用价值。CN115725745ACN115725745A权利要求书1/1页1.基于绵羊ABCD4基因设计与绵羊多胸椎数相关的SNP分子标记中的应用。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，基于绵羊第7号染色体上第82504715处的多态性设计所述SNP分子标记，所述多态性为T/A。3.一种与绵羊多胸椎数相关的SNP分子标记的扩增引物组，其特征在于，包括上游引物F、下游引物R和延伸引物S1，所述上游引物F的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，下游引物R的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，延伸引物S1的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。4.一种鉴定绵羊ABCD4基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤，以待测绵羊的基因组DNA为模板，利用权利要求3所述扩增引物组中的上游引物F和下游引物R，进行PCR扩增反应；对PCR扩增产物进行消化后，以消化后的PCR扩增产物为模板，利用权利要求3所述扩增引物组中的延伸引物S1进行延伸反应；根据延伸产物进行基因型判定。5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述PCR扩增反应的程序，包括：94℃预变性5min；94℃变性20s，56℃退火30s，72℃延伸60s，45个循环；72℃再延伸5min。6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，利用SAP酶对PCR扩增产物进行消化。7.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述延伸反应的程序，包括：94℃预变性30s；94℃变性5s，52℃退火5s，80℃延伸5s，5个循环，40个循环；72℃再延伸3min。8.一种检测绵羊多胸椎数的试剂盒，其特征在于，包括权利要求3所述扩增引物组。9.权利要求3所述扩增引物组或权利要求4～7任一项所述方法或权利要求8所述试剂盒在绵羊分子标记辅助育种中的应用。2CN115725745A说明书1/6页一种与绵羊多胸椎数相关的SNP分子标记及扩增引物组和应用技术领域[0001]本发明属于分子标记技术领域，具体涉及一种与绵羊多胸椎数相关的SNP分子标记及扩增引物组和应用。背景技术[0002]多胸椎数性状是绵羊最重要的经济性状之一，因性状复杂性和家系群体的限制，难以用常规育种方法来快速改良，而分子技术能有效快速地提高其遗传进展，因此鉴定与多胸椎数相关的主效基因或分子遗传标记是现代分子育种的关键。[0003]ABCD4基因位于绵羊7号染色体上，包含18个外显子，编码区总长1712bp，编码蛋白含570个氨基酸。ABCD4基因为ATP结合盒式(ABC)D亚家族4，是ABC转运蛋白D亚家族的成员，人的ABC转运蛋白D亚家族包含ABCD1到ABCD4共4个基因。其中ABCD4在内质网和溶酶体中表达，参与维生素B12的代谢，血液中维生素B12的浓度与同型半胱氨酸的浓度负相关，当维生素B12浓度低时，同型半胱氨酸浓度升高，可能导致骨质疏松。缺乏维生素B12可能导致脊椎病，例如胸脊椎的后柱及侧柱异常。发育期间维生素B12的浓度较低与人的神经管缺陷相关。目前关于ABCD4基因对绵羊胸椎数目的具体影响机制还不是很清楚。所以，通过分子生物学手段，找出影响绵羊胸椎数的突变位点并深入研究位点影响胸椎数目的机制，对于绵羊分子育种工作来说是非常有必要的。发明内容[0004]本发明的目的在于提供一种与绵羊多胸椎数相关的SNP分子标记及扩增引物组和应用，所述SNP分子标记与绵羊多胸椎