一种与绵羊奶体细胞数相关的SNP分子标记及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114525346A(43)申请公布日2022.05.24(21)申请号202210189570.4(22)申请日2022.03.01(71)申请人天津市农业科学院地址300192天津市南开区航天道26号(72)发明人郭晓飞张效生张金龙李义海冯婧姚大为李玉鹏(74)专利代理机构天津市杰盈专利代理有限公司12207专利代理师朱红星(51)Int.Cl.C12Q1/6888(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书3页序列表1页附图2页(54)发明名称一种与绵羊奶体细胞数相关的SNP分子标记及应用(57)摘要本发明提供一种与绵羊奶体细胞数相关的SNP分子标记及应用，它位于第11号染色体第42139093处；其SNP分子标记的多态性为A/G；所述SNP位点信息基于的绵羊基因组序列信息版本号为ARS‑UI_Ramb_v2.0，2020年11月。本发明所提供的SNP分子标记，不受绵羊年龄和性别的限制，可用于绵羊奶体细胞数性状的早期选育。针对刚出生的小母羊收集血液样本后，经基因分型后即可预测其成年后奶样中体细胞数的高低；针对刚出生的小公羊收集血液样本后，经基因分型后即可知道其是否携带奶体细胞数低（低乳房炎患病率）的遗传特性，以指导其配种并预测其后代母羊的奶样体细胞数的情况。CN114525346ACN114525346A权利要求书1/1页1.一种与绵羊奶体细胞数性状相关的SNP分子标记，其特征在于它位于第11号染色体第42139093处；其SNP分子标记的多态性为A/G。2.一种如权利要求1所述的SNP分子标记的特异性引物，其特征在于，上游引物序列SEQIDNO:1所示，下游引物序列如SEQIDNO:2所示；SEQNo.1：AAGTCCCTGCTCAAGAACGASEQNo.2：GAGCCTGTCAGTGTGGATCA。3.一种如权利要求1所述的SNP分子标记在预测绵羊奶体细胞数中的应用。4.一种如权利要求1所述的SNP分子标记在预测绵羊奶体细胞数中的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）颈静脉抽取目标绵羊的抗凝血，并用于DNA提取；（2）以提取的DNA为模板，利用SNP分子标记的特异性引物进行PCR扩增，PCR扩增的退火温度为60℃，并获得目标PCR产物；（3）对步骤（2）中的PCR产物进行sanger测序，分析其基因型（AA、AG、GG）；（4）结果判断：根据基因型不同判断绵羊的奶样体细胞数，以预测其患乳房炎的风险。5.权利要求4中所述的方法，其中绵羊的DNA从其颈静脉抗凝血中提取。6.一种如权利要求1中所述的SNP分子标记在选育低体细胞数、低乳房炎患病率的绵羊中的应用。7.一种利用如权利要求1中所述的SNP分子标记选育低体细胞数（低乳房炎患病率）绵羊的方法，其特征在于：不断选择保留羊群中第11号染色体第42139093处SNP分子标记为G的基因后代，不断淘汰羊群中第11号染色体第42139093处SNP分子标记为A的基因后代。2CN114525346A说明书1/3页一种与绵羊奶体细胞数相关的SNP分子标记及应用技术领域[0001]本发明涉及一种与绵羊奶体细胞数相关的SNP分子标记及其应用，属于绵羊SNP分子标记技术领域。背景技术[0002]奶样中的体细胞由白细胞和少量上皮细胞所组成，体细胞主要来源于机体免疫系统，其在奶中发挥着吞噬异物、排除感染和修复组织等功能作用。乳房中体细胞是始终存在的，数量变化范围也较大。当绵羊乳房受到病菌等感染时，奶样中的体细胞会大大增加；而炎症减轻后，其体细胞数也将逐渐减少。因此，绵羊奶中的体细胞数是反映绵羊乳房健康状况和判断其乳房炎轻重的重要手段，同时也和绵羊奶的质量有关。在奶牛中，研究者们通常认为体细胞数超过500k/ml时，则判断个体可能感染了乳房炎。[0003]影响奶样中体细胞数变化的因素有很多，包括年龄、泌乳期、体型、挤奶时间、季节、营养水平和遗传因素等。在奶牛中，已报道了信号通路及一些关键基因的多态性与其体细胞数性状存在密切的关联，如细胞内JAK‑STAT信号转到通路参与了细胞增殖、分化、凋亡和免疫调节等许多重要生物学过程，介导着乳房中的免疫反应；其中STAT5b和JAK2等基因的多态性（SNP变异）与牛奶中的体细胞数存在显著相关关系。[0004]目前，尚没有发现与绵羊奶体细胞数性状紧密相关的SNP位点。发明内容[0005]本发明公开了一种与绵羊奶体细胞数相关的SNP分子标记及其应用，通过本发明公开的特异性引物，所检测的SNP位点突变信息可以用于绵羊低体细胞数（低乳房炎患病率）性状的分子标记辅助选育工作。[0006]为实现绵羊奶体细胞数的分子鉴定和未来的分子标记