用于使蛋白质多聚化的变体结构域及其分离.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114702587A(43)申请公布日2022.07.05(21)申请号202210393772.0(51)Int.Cl.(22)申请日2020.05.08C07K16/28(2006.01)C07K16/36(2006.01)(30)优先权数据C07K16/46(2006.01)19173633.92019.05.09EPC07K16/00(2006.01)(62)分案原申请数据C07K1/18(2006.01)202080048983.X2020.05.08C12N5/10(2006.01)(71)申请人美勒斯公司C12N15/13(2006.01)地址荷兰乌特勒支A61K39/395(2006.01)(72)发明人科内利斯·阿德里安·德克吕夫彼得·布莱恩·西尔弗曼理查德·博诺(74)专利代理机构北京派特恩知识产权代理有限公司11270专利代理师王子晔李维凤权利要求书7页说明书72页序列表50页附图36页(54)发明名称用于使蛋白质多聚化的变体结构域及其分离(57)摘要本发明涉及用于产生且分离包括第免疫球蛋白多肽和第二免疫球蛋白多肽的免疫球蛋白蛋白质的手段和方法，尤其关于用于产生且分离包括所述第免疫球蛋白多肽和第二免疫球蛋白多肽的蛋白质的手段和方法。通过包括来自产生所需免疫球蛋白蛋白质的细胞的氨基酸变体及变体分离结构域，可将如所产生的所需免疫球蛋白蛋白质与免疫球蛋白蛋白质混合物分离。CN114702587ACN114702587A权利要求书1/7页1.一种免疫球蛋白CH1、CH2、CH3区或所述区的组合，所述区包括在免疫球蛋白中未经表面暴露的氨基酸的变体，其中所述变体选自‑中性氨基酸变带负电氨基酸；‑带正电氨基酸变中性氨基酸；‑带正电氨基酸变带负电氨基酸；‑中性氨基酸变带正电氨基酸；‑带负电氨基酸变中性氨基酸；以及‑带负电氨基酸变带正电氨基酸。2.根据权利要求1所述的免疫球蛋白区，其包括在免疫球蛋白中未经表面暴露的氨基酸的两个或更多个变体。3.根据权利要求1或权利要求2所述的免疫球蛋白区，其中所述氨基酸的变体不处于CH1/CL、CH2/CH2结构域或CH3/CH3结构域界面中。4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫球蛋白区，其为IgG区，优选为IgG1区。5.根据权利要求1至4中任一项所述的免疫球蛋白区，其中所述未经表面暴露的氨基酸为内埋式的。6.一种免疫球蛋白CH1区，其包括选自以下的氨基酸的变体：N159、N201、T120、K147、D148、Y149、V154、A172、Q175、S190以及K213(EU编号)。7.根据权利要求5所述的免疫球蛋白CH1区，其包括选自以下的氨基酸的变体：D148、Y149、V154、N159、A172、S190以及N201。8.根据权利要求6或权利要求7所述的免疫球蛋白CH1区，其包括选自N159和/或N201的氨基酸的变体。9.根据权利要求1至8中任一项所述的免疫球蛋白CH1区，其包括所述氨基酸的两个或更多个变体。10.根据权利要求9所述的免疫球蛋白CH1区，其中所述两个或更多个变体包括以下中的两者或更多者：‑中性氨基酸变带负电氨基酸；‑带正电氨基酸变中性氨基酸；‑带正电氨基酸变带负电氨基酸；或以下中的两者或更多者：‑中性氨基酸变带正电氨基酸；‑带负电氨基酸变中性氨基酸；以及‑带负电氨基酸变带正电氨基酸。11.根据权利要求9或权利要求10所述的免疫球蛋白CH1区，其包括选自以下的组的氨基酸的变体：A172/S190/N201、T197/K213、D148/Q175、N159/Q213、K147/Q175、Y149/V154/A172/S190、N201/K213、T120/N201、N201/N159、T120/N159、T120/N201/N159以及N201/K213/N159。12.一种免疫球蛋白CH2区，其包括氨基酸V303的变体。13.一种免疫球蛋白CH3区，其包括选自以下的氨基酸的变体：K370、E382以及E388，优选E388。2CN114702587A权利要求书2/7页14.根据权利要求6至13所述的免疫球蛋白区，其中所述变体选自‑中性氨基酸变带负电氨基酸；‑带正电氨基酸变中性氨基酸；‑带正电氨基酸变带负电氨基酸；‑中性氨基酸变带正电氨基酸；‑带负电氨基酸变中性氨基酸；以及‑带负电氨基酸变带正电氨基酸。15.根据权利要求1至5所述的免疫球蛋白区，其包括根据权利要求6至14所述的免疫球蛋白区。16.一种免疫球蛋白CH1/CL结构域、CH2结构域或CH3结构域，其包括根据权利要求1至15所述的免疫球蛋白区。17.根据权利要求16所述的免疫球蛋白CH2结构域，其进一步包括Fc沉默突变。18.根据权利要求