最新精编医学专题—流式细胞术(FlowCytometry-FCM)描述.ppt

流式细胞术（FlowCytometryFCM)1、流式细胞仪(FlowCytometer):是集光电子物理光电测量计算机细胞荧光化学单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。2、流式细胞术(FlowCytometry):利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒(kēlì)进行多参数、快速（每秒可达1000-10000个）的定量分析和分选（纯度可达99%以上）的技术。流式细胞仪结构(jiégòu)流式免疫(miǎnyì)分型技术要点FCM的主要测定(cèdìng)指标FCM标记(biāojì)方法荧光(yíngguāng)素种类PE最强适用于弱表达抗原(kàngyuán)FITC最便宜适用于强表达抗原适用范围广biotin-avidin不适合弱抗原的检测数据(shùjù)显示方式流式常见(chánɡjiàn)图形(HistogramPlot)流式细胞的主要(zhǔyào)信息:Fluorescence流式常见(chánɡjiàn)图形(HistogramPlot)流式常见(chánɡjiàn)图形(DotPlot)第二节流式细胞术的科研(kēyán)应用流式应用常见(chánɡjiàn)范围抗体(kàngtǐ)标记的方法抗体(kàngtǐ)的选择实验对照(duìzhào)的设计空白对照和阴性(yīnxìng)对照的比较：实验(shíyàn)标本的处理流式检测应用(yìngyòng)实例凋亡检测(jiǎncè)-每一步都有检测(jiǎncè)试剂盒细胞周期细胞周期不能区分(qūfēn)凋亡与死亡细胞Sub-G0/G1peaks---PIstainingCaspasesAnnexinVAssay建议用于悬浮(xuánfú)细胞AnnexinVAssay能够区分死亡(sǐwáng)与凋亡流式“TUNEL”第二十九页共八十一页。第三十页共八十一页。IntracellularCytokine-Protocol第三十二页共八十一页。SORTING（细胞(xìbāo)分选）DIMERXantigenspecificTcellassaymethodformonitoringcellularresponseCBA(CytometricBeadArray)TraditionalAnalysis--PercentpositiveDeterminationoftheCD4PEABConlymphocytes第三节流式细胞术的临床(línchuánɡ)应用流式细胞白血病免疫(miǎnyì)分型流式细胞的免疫(miǎnyì)分型FCM应用(yìngyòng)细胞增殖周期测定(cèdìng)和DNA倍体分析2）利用DNA的荧光染料如PI（Propidiumiodide碘化丙啶）与细胞内的DNA结合(jiéhé)可反映细胞内DNA含量。采用DNA直方图显示。具有2CDNA含量细胞为G0/G1期细胞4CDNA含量细胞为G2/M期细胞DNA含量介于两者之间的细胞为S期细胞。3）DNA倍体：主要比较(bǐjiào)G0/G1期细胞DNA含量的变化。用DNA指数（DI）表示。DNA指数=测量样本G0/G1期DNA含量/正常人淋巴细胞G0/G1期DNA含量以正常人淋巴细胞作为对照。正常细胞DNA指数为1.00DNA指数＞1为超2倍体＜1为亚2倍体两者可统称为非整倍体。非整倍体细胞中肿瘤的特异性标志实体肿瘤中出现频率较高。第四十六页共八十一页。第四十七页共八十一页。第四节凋亡(diāowánɡ)检测2）DNA链损伤“TUNEL”法3）Annexin-V-FITC/PI双染法4）线粒体细胞膜电位(diànwèi)的检测5）凋亡相关基因的检测——免疫标记法检测基因第五十页共八十一页。第五十一页共八十一页。第五节免疫功能(gōngnéng)的检测第六节FCM在血液学中的应用(yìngyòng)2）CD34+造血干/祖细胞的检测。主要用于干细胞移植(yízhí)及基因治疗方面的检测。3）活化血小板及网织血小板的检测在栓塞性疾病如脑血管和心肌梗塞的患者可出现活化的血小板增多。而血小板减少的患者如果出现网织血小板增多则说明血小板减少的原因为血小板破坏过多所致。4）阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）的发病机制为X染色体上的PIG-A基因发生突变引起(yǐnqǐ)糖化肌醇脂（GPI）锚合成障碍使GPI锚连蛋白缺乏已证实的GPI锚连蛋白有10余种用于PNH诊断的主要为CD55和CD59两种如果在红细胞或WBC上出现CD55或/和CD59的减少可诊断为PNH。第五十六页共八十一页。第五十七页共八十一页。5）网织红细胞计数(jìshù)6）白细