不同提取方法对黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的影响.doc

不同提取方法对黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的影响
潘宏林张坦赵元元(湖北中医学院,武汉430061)
摘要目的:比较两种不同提取方法对黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的影响。方法:分别用大孔树脂法和ＫＯＨ回流提取法材制备供试品,点样于硅胶Ｇ板上,展开、显色,再用反射法双波长锯齿扫描(λＳ515ｎｍ、λＲ675ｎｍ),以外标两点法回归计算黄芪甲苷含量。结果:大孔树脂法测得黄芪甲苷平均含量为007971%,而ＫＯＨ回流提取法测得黄芪甲苷平均含量为01888%;平均回收率为9714%,ＲＳＤ=232%。结论:ＫＯＨ回流提取法处理黄芪药材后,其中黄芪甲苷含量较大孔树脂法处理的黄芪药材高,且二者差异明显。
关键词黄芪黄芪甲苷含量测定皂化大孔树脂
黄芪药材中含有多种皂苷,在索氏提取过程中,使用氢氧化钾甲醇溶液皂化,经加热回流处理,极易将其他类型的皂苷乙酰化转换为黄芪甲苷,故按此法处理时测定的黄芪甲苷含量与药典所规定的大孔吸附树脂法测得的含量之间有一定的差异。现报道如下。
1仪器与试剂
ＣＳ-9000型双波长飞点薄层扫描仪(日本岛津);黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所);薄层硅胶Ｇ(青岛海洋化工厂);微量进样器(上海医用激光仪器厂);试剂均为分析纯。
方法与结果
对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品2.10ｍｇ,用甲醇溶解,并定容至2ｍｌ,配制成每1ｍｌ含1.05ｍｇ对照品溶液
供试品溶液的制备
2.21大孔树脂提取法:精密称取黄芪粗粉约15ｇ,置索氏提取器中加甲醇40ｍｌ,冷浸过夜,再加甲醇适量,回流4ｈ,提取液回收甲醇并浓缩至干,残渣加水10ｍｌ,微热使完全溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次20ｍｌ,合并正丁醇提取液,用氨试液提取2次,每次20ｍｌ,弃去氨液,正丁醇蒸干,残渣加水3～5ｍｌ使溶解,放冷,通过Ｄ101型大孔吸附树脂柱(内径15ｃｍ,长12ｃｍ),以水50ｍｌ洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30ｍｌ洗脱,弃去40%乙醇洗脱液,继用70%乙醇50ｍｌ洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解,并转移至2ｍｌ量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为供试品Ⅰ,按相同操作处理配制供试品Ⅱ。
2.2.2ＫＯＨ回流提取法:精密称取黄芪粗粉约1.5ｇ,置索氏提取器中用2%ＫＯＨ甲醇溶液20ｍｌ,冷浸过夜,再加热回流提取至无色,提取液回收并浓缩至干,残渣加水10ｍｌ使溶解,用乙醚振摇提取3次,每次20ｍｌ,乙醚层用水5ｍｌ洗,合并水液,用水饱和的氯仿正丁醇(4∶1)振摇提取4次,每次20ｍｌ,合并氯仿正丁醇提取液,用05%ＫＯＨ溶液20ｍｌ振摇提取1次,碱水液用水饱和的氯仿正丁醇振摇提取2次,每次20ｍｌ,合并氯仿正丁醇提取液,蒸干,用甲醇溶解,并转移至2ｍｌ量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为供试品Ⅲ,按相同操作处理配制供试品Ⅳ。
2.3薄层扫描
2.3.1点样:供试品Ⅰ、Ⅱ:用微量点样器分别吸取供试品10μｌ和5μｌ,对照品溶液2μｌ和4μｌ,交叉点于同一硅胶Ｇ薄层板;供试品Ⅲ、Ⅳ:用微量点样器分别吸取供试品8μｌ和4μｌ,对照品溶液2μｌ和4μｌ,交叉点于同一硅胶Ｇ薄层板。
2.3.2展开剂:供试品Ⅰ、Ⅱ使用的展开剂:氯仿：甲醇：水(13∶6∶2)10℃以下放置过夜的下层液;供试品Ⅲ、Ⅳ使用的展开剂:[正丁醇乙酸乙酯水(4∶1∶5)的上层溶液]甲醇(7∶1)。
2.3.3展开方式:层析缸一侧槽中加入展开剂约20ｍｌ,另一侧槽中放入点样后的薄层板,并用氨水饱和30ｍｉｎ,然后上行展开,展距12ｃｍ。
2.3.4显色:喷以10%硫酸乙醇溶液,在100℃加热至斑点显色清晰,取出,在薄层板上覆盖同样大小的洁净玻璃板,周围用胶布固定,待薄层扫描使用。
2.3.5扫描:反射法双波长锯齿扫描,检测波长515ｎｍ,参比波长675ｎｍ,ＳＸ=3。
2.4标准曲线的制作精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(105ｍｇ/ｍｌ)10、20、30、40、50μｌ分别点样于同硅胶Ｇ薄层板上,按上述薄层扫描法展开、显色、扫描,以测定的峰面值为纵坐标,对照品的点样量为横坐标,绘制得标准曲线:ｙ=4695.99ｘ+5085.72(ｒ=0996),结果表明黄芪进样量在1.05～5.25μｇ范围内,斑点峰面积积分值与对照品点样量呈良好的线性关系。
2.5稳定性试验精密吸取样品供试品3μｌ按上述薄层扫描法点样、展开、显色、扫描,测定斑点峰面积,每隔30ｍｉｎ扫描测定一次,连续测定3ｈ,结果表明斑点峰面积积分值稳定,ＲＳＤ=23%(ｎ=6),说明黄芪甲苷显色后在3ｈ内稳定。
2.6精密度试验精密吸取同一样品供试品3μｌ点样于同一薄层板上,按上述薄层扫描法展开、显色、扫描,测定斑点峰面积积分值,结果表明同板的ＲＳＤ=21%(ｎ=6),异板的ＲＳＤ=36%(ｎ=12)。
2.7回收率试验称取已知含量(含黄