城市生活垃圾除臭酵母的筛选与鉴定.pdf

环境科学导刊http://hjkxdk.yies.org.cn2011，30(5)CN53－1205/XISSN1673－9655

城市生活垃圾除臭酵母的筛选与鉴定

许丽娟，魏小武，孙翔宇，陈薇，贺月林
(湖南省微生物研究所，湖南长沙410009)

摘要:以减少氨气释放量为主要指标，从初筛获得的具有除臭效果的菌种中复筛出一株J3菌株，
其在实验室条件下可减少氨气释放量达80%以上，对生活垃圾具有明显的除臭效果。通过对其菌落和菌
体形态特征观察及生理生化实验，初步确定为掷孢酵母。
关键词:酵母;除臭;筛选与鉴定
中图分类号:X13文献标识码:A文章编号:1673－9655(2011)05－0001－03

城市生活垃圾治理是目前我国城市面临的最严的氨水2ml;再往大烧杯中放入装有20ml0.005N
重的环境问题之一。我国城市生活垃圾年清运量约硫酸吸收液的50ml小烧杯，大烧杯盖上双层塑料
为1.5亿t，除少部分焚烧、堆肥或回收利用外，薄膜密封。以等量的无菌水作为对照，每个处理重
绝大部分被运送到填埋场进行处置。这些城市固体复3次，置于30℃的培养箱中培养。24h后，取出
［］
废弃物在转运、堆放处理过程中产生大量臭气1。小烧杯检测氨的浓度。氨的测定采用纳氏试剂比
恶臭气体不仅污染空气，对生态环境造成影响，还色法［5］。
会导致人、畜疾病的传播，影响居民的正常生活和1.3.3酵母菌的鉴定
［］
身体健康2。笔者通过对城市生活垃圾除臭酵母对筛选出的脱氨作用最强的菌株，通过形态学
的筛选及鉴定，获得无害高效的除臭酵母菌株
、。观察并结合一些生理学试验来进行鉴定。
材料与方法
11.3.3.1菌落和菌体形态学观察
菌种来源
1.1将新培养的酵母接于PDA平板上，置于30℃
试验菌种是从城市生活垃圾中分离纯化出来
、恒温培养箱中培养3d，观察菌落形态;用接种环
的具有一定除臭效果的酵母菌，从中优选出3株，以无菌操作法挑取菌落少许，制成水浸片，用显微
分别为生活垃圾取自浏阳垃圾填
J1、J2、J3。镜观察细胞形态。
埋场
。1.3.3.2菌的生理生化特性
1.2培养基［6］
糖类发酵试验。往试管内注入12.5%的豆
分离纯化用麦芽汁培养基［3］，培养用PDA培
芽汁3.2ml，并于每支试管内放入一倒置的杜氏小
养基［4］。
管，试管口包扎好后，115℃灭菌20min备用。分
1.3实验方法
别于上述每支试管内加入10%葡萄糖、麦芽糖、
1.3.1菌株的初筛
蔗糖、乳糖和半乳糖糖液0.8ml，静置2h，使杜氏
按10%接种量接入所试菌株于发臭垃圾中，
管内外的糖液均匀扩散。将J3菌分别接种于含糖
以自来水作为对照，分别于接种后24h、48h、72h
试管中，置30℃恒温箱内培养3d后观察，杜氏管
使用便携式氨气检测仪NBX80－NH检测，初步
3内有气泡存在则说明J3菌可发酵该种糖类。
判断各菌株的除臭效果，对经便携式检测仪测定有
［］
硝酸盐利用试验7。①将测试酵母菌进行饥
除臭能力的微生物进行复筛实验。
饿培养。把活化好的菌株接种在4ml无菌碳源基础
1.3.2菌株的复筛
培养基中，25℃培养5～7d，以消耗细胞内多余的
取18ml菌液于2L大烧杯中，加入500mg/L
氮源，防止出现假阳性结果。②制备碳源基础平板
培养基。取11.7g酵母碳源基础培养基，20g纯化
收稿日期:
2011－03－31琼脂粉，加1000ml蒸馏水，加热将琼脂粉熔化后
作者简介:许丽娟(1980－)，女，湖南岳阳县人，助理研究
员，主要从事环境微生物研究。经115℃灭菌30min，冷却至大约45℃时倒入预先
—1—

书
环境科学导刊http://hjkxdk.yies.org.cn第30卷第5期2011年10月

已加入1ml饥饿培养后的酵母细胞悬液的平板中，氨的去除率最高，除臭效果也最稳定。复筛实验结
混匀后静置，凝固后放在25℃培养箱内数小时，果与初筛实验基本相符，但不难看出初筛实验也存
使平板表面干燥，然后把少量所测氮源化合物点在在一定的局限性，在初筛实验中J2的除臭效果要
平板上。点置试剂后的平板在25℃下培养2～3d，优于J1，但复筛实验正好相反，因此，只有将初
观察结果，阳性反应者在所点试剂处或周围有酵母筛与复筛方法相结合才能获得高效脱臭菌株。
菌落生长。2.3菌株的形态学观察
产生类淀粉化合物试验［6］。将菌株J3划线接对J3菌株的菌落及菌体形态进行了观察。从
于PDA固体培养基中，置于28℃温箱内培养，待图2、图3可见，在PDA固体培养基上J3菌株菌
长好后，向平板上倾入卢哥氏(Lugo1)碘液，若落圆形，湿润光滑，中间凸起，边缘整齐，易挑
酵母菌落周围呈现蓝色，则为阳性。起，颜色乳白色;光学显微镜下可见细胞椭圆形，
产酸试验［6