葡萄中酵母菌的筛选及菌株鉴定.pdf

葡萄中酵母菌的筛选及菌株鉴定冯炘摘要：以葡萄为菌源分别在葡萄发酵的前期、中期、后期取一定的发酵液进行稀释涂布后经过YPD培养基对涂布后的菌株进行分离纯化。将分离纯化后的菌株进行WL培养基聚类分析及生理生化实验并用TTC培养基对菌株进行初筛选取红色最深的菌株作为复筛菌株。对复筛菌株进行发酵性能测定筛出发酵性能较好菌株编号为Y1并对此菌株进行分子生物学鉴定。Y1菌株的26SrDNA鉴定结果表明其为酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）此菌株为后续发酵实验提供了基础。Abstract：WithgrapeasthesourceofbacteriaacertainfermentationbrothwasdilutedandcoatedintheearlymiddleandlatestagesofgrapefermentationandthecoatedstrainwasseparatedandpurifiedbyYPDmedium.TheisolatedandpurifiedstrainsweresubjectedtoWLcultureclusteranalysisandphysiologicalandbiochemicalexperimentsandthestrainswerepre-screenedwithTTCmedium.Thereddeststrainwasselectedasthere-screeningstrain.Thefermentationperformanceofthedouble-screenedstrainwasdeterminedandthestrainwithbetterfermentationperformancewasscreenedoutandthenumberwasY1andmolecularbiologyidentificationwasperformedonthestrain.The26SrDNAidentificationofY1strainshowedthatitwasSaccharomycescerevisiaewhichprovidedabasisforsubsequentfermentationexperiments.关键词：酵母菌;分离鉴定;发酵特性;生理生化0引言酵母菌是一类被广泛应用在发酵工业中的单细胞真菌它广泛分布在自然界各处[1]。酵母菌是以芽孢繁殖为主的单细胞真核微生物大部分的酵母菌是腐生的生活在含糖量较高、偏酸性的环境中如生长在花朵、植物果实表面等还有很大一部分生活在蔬菜园、水果园园的土壤中;小部分为寄生的[23]。酵母菌的生长繁殖速度较快、也比较容易分离纯化。酵母常用于酿酒、食品制作等是人类最早应用于生活的微生物之一。随着人们对酵母菌研究的逐步深入酵母菌也逐渐被应用在酶制剂、物料生产、医药工业以及环境保护等各个方面。目前酵母菌主要应用在构建基因工程菌、酿酒及其他发酵产业。酿酒酵母可以发酵不同来源的植物碳水化合物例如：水果汁等。葡萄果实甜度高、颗粒饱满、营养丰富适合微生物的生长繁殖酵母菌在有氧和无氧的环境中都能生长即酵母菌是兼性厌氧菌在有氧的情况下它把糖分解成二氧化碳和水且酵母菌生长较快;在缺氧条件下细胞进行无氧酵解在酶的作用下葡萄糖代谢为丙酮酸丙酮酸在无氧条件下在细胞内丙酮酸脱羧酶和乙醛脱氢酶作用下生成乙醇和二氧化碳[4-6]。微生物菌株是生产乙醇的主力军在以木质纤维素为原材料的发酵生产乙醇的工艺中酵母菌的筛选显得格外重要[7-10]。本文以葡萄为菌源通过稀释涂布、YPD分离纯化、WL培养基聚类分析、生理生化、TTC培养基初筛及菌株发酵性能测定得到发酵性能较高的菌株为之后课题组对秸秆发酵液产乙醇的工艺提供了基础。1材料与方法1.1培养基与试剂1.1.1培养基YPD培养基：葡萄糖20g蛋白胨20g酵母浸粉10g琼脂粉25g蒸馏水100