轮状病毒和诺如病毒液相芯片检测用引物、探针及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102154528A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102154528A(43)申请公布日2011.08.17(21)申请号201110131023.2(22)申请日2011.05.20(71)申请人何雅青地址518020广东省深圳市南山区龙珠大道龙苑路8号申请人胡春凌汪朝晖(72)发明人何雅青胡春凌汪朝晖(74)专利代理机构深圳市汇力通专利商标代理有限公司44257代理人李保明茅秀彬(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)权利要求书1页说明书10页C12N15/11(2006.01)序列表3页附图2页(54)发明名称轮状病毒和诺如病毒液相芯片检测用引物、探针及试剂盒(57)摘要本发明提供了一种轮状病毒和诺如病毒液相芯片检测用引物、探针及试剂盒，所述引物包括特异性扩增A型轮状病毒、GI型诺如病毒和GII型诺如病毒序列的三对引物，所述探针包括A型轮状病毒、GI型诺如病毒和GII型诺如病毒的三条特异性检测探针，试剂盒包括所述三对引物以及用所述三条特异性检测探针与荧光编码微球进行偶联制成的特异性检测微球混合物。经实验证明，利用本发明引物和探针通过多重PCR结合液相芯片检测的方法，能够同时对A型轮状病毒和诺如病毒GI型、GII型进行准确地检测，而且特异性强、灵敏度高。CN102548ACCNN110215452802154529A权利要求书1/1页1.一种轮状病毒和诺如病毒液相芯片检测用引物，其特征在于：包括特异性扩增A型轮状病毒、GI型诺如病毒和GII型诺如病毒序列的三对引物，其碱基序列分别如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2、SEQIDNO:3和SEQIDNO:4、及SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示，其中碱基序列为SEQIDNO:2、SEQIDNO:4和SEQIDNO:6的引物的5’端带Biotin标记。2.一种与权利要求1所述引物配套使用的探针，其特征在于：包括A型轮状病毒、GI型诺如病毒和GII型诺如病毒的特异性检测探针，其碱基序列分别如SEQIDNO:11、SEQIDNO:12和SEQIDNO:13所示，探针的5’端带NH2标记。3.一种轮状病毒和诺如病毒液相芯片检测用试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的三对引物。4.根据权利要求3所述的相芯片检测用试剂盒，其特征在于：还包括用权利要求2所述的探针与荧光编码微球进行偶联制成的特异性检测微球混合物。5.根据权利要求3或4所述的相芯片检测用试剂盒，其特征在于：还包括A型轮状病毒、GI型诺如病毒和GII型诺如病毒阳性标准品，它们分别是用SEQIDNO:1和SEQIDNO:2、SEQIDNO:7和SEQIDNO:8、SEQIDNO:9和SEQIDNO:10所示序列的引物对得到的扩增产物为插入子构建的重组质粒。2CCNN110215452802154529A说明书1/10页轮状病毒和诺如病毒液相芯片检测用引物、探针及试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物检测技术，特别是轮状病毒和诺如病毒液相芯片检测用引物、探针及试剂盒。背景技术[0002]急性腹泻是一个全球性的严重的公共卫生问题，在儿童的发病率仅次于呼吸道感染，列为第二位。在发展中国家5岁以下儿童尤为突出，其年发病率为2.2次。全世界每年发生30-50亿例病例，其中500-1000万例死亡，其病原有细菌、病毒及原虫等，以病毒最为严重。A组轮状病毒是儿童重症胃肠炎（腹泻）主要病原，占腹泻住院儿童中的20-60%。[0003]轮状病毒(rotavirus,RV)为呼肠病毒科轮状病毒属病毒。病毒体呈圆球形，有双层衣壳，每层衣壳呈二十面体对称。病毒体的核心为双股RNA，由11个不连续的节段组成。每一个片段各编码1种蛋白，VP1～4，VP6和VP76种结构蛋白，其中VP4经胰蛋白酶裂解可产生具有增强病毒感染性的VP5和VP8；5种非结构蛋白为NSP1～NSP5。根据内层壳衣中VP6蛋白上抗原的差异，RV被分为A，B，C，D，E，F，G七组，其中A群为主要引起婴幼儿腹泻。[0004]诺如病毒(Noruvirus，简称NoV)的感染是引起成人腹泻的重要病因，广泛地分布于全世界。该类病毒常常可以引起成人和年长儿童肠炎的暴发流行，也是食物集体中毒最主要的病毒，占腹泻住院儿童中的5-15%。根据NoVRNA多聚酶和衣壳蛋白区核苷酸序列的相似性，将NoV分为5个组：GI、GII、GIII、GIV、GV。感染人的NoV包括GⅠ、GⅡ和GIV。近年来，变异株GII4在芬兰、挪威、荷兰、澳大利亚、日本、台湾和香港出现，且逐渐成为流行的优势株；一些国家和地区还发现NoV的重组株。[0005]腹泻病毒的检测方法主要包括：电镜、病毒分离鉴定、血清