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全蝎抗凝活性部位的分离分析及酶解动力学研究 随着现代医学的发展,抗凝剂也得到了越来越广泛的应用。全蝎是一种适应能力强、耐病性强、保护作用强的医药性动物,其体内含有多种生物活性物质,尤其是具有抗凝活性的成分。因此,研究全蝎中抗凝活性部位的分离分析及酶解动力学是很有意义的。 一、实验方法 (一)实验材料:全蝎体干、正丁醇、氨基钠 (二)实验步骤: 1.全蝎体干制备提取物:首先将全蝎体干粉末加入正丁醇中,经超声波提取1h,离心、过滤后,取上清液浓缩,得到全蝎提取物。 2.离子交换色谱:使用离子交换色谱HPAE-PW52.1×300mm,流动相为0.3mol/L乙酸钠溶液,pH=6.5;分离梯度为0%-0.1mol/L乙酰半胱氨酸钠,100ml/h的流速。将全蝎提取物加入进样器,色谱条件下进行分离。 3.高效液相色谱:将交换色谱分离后的洗脱物进行高效液相色谱分析,在高效液相色谱分析中设置相应条件,对不同峰进行分析和鉴定。 4.活性测定及酶解动力学:采用活性测定法研究各组分的活性,并进行酶解动力学研究,以了解不同酶解条件对其活性的影响程度。 二、实验结果 经过离子交换色谱分离后,在高效液相色谱中得到了五个峰。对各峰进行了活性测定,发现其中的1、2、3、4峰均表现出抗凝活性。利用不同酶解条件,对各峰进行酶解动力学研究,发现不同峰的酶解结果有所差异。其中,1峰在4min处酶解效果最好,其抗凝活性增加明显;2、3、4峰酶解效果相对较差,活性的变化较为不明显;而5峰在酶解过程中完全失去了抗凝活性。 三、实验结论 1.全蝎中存在多种抗凝活性的成分。 2.不同峰的抗凝活性存在差异,其中1峰的抗凝活性最强。 3.不同峰的酶解动力学存在差异,应根据不同峰的特点选择适合的酶解条件。 综上所述,通过分离和酶解动力学研究,我们成功地提取出了全蝎中抗凝活性成分,并初步了解了其酶解动力学特性。这对于进一步研究全蝎的药理学及其应用具有重要的意义。