一株高产天然虾青素的红法夫酵母菌株及其选育方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102864087A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102864087A(43)申请公布日2013.01.09(21)申请号201210321949.2C12N15/04(2006.01)(22)申请日2012.09.03C12R1/645(2006.01)(83)生物保藏信息CGMCCNo.63552012.07.12(71)申请人浙江皇冠科技有限公司地址310012浙江省杭州市黄姑山路40号(72)发明人胡向东朱静梁新乐(74)专利代理机构杭州天勤知识产权代理有限公司33224代理人胡红娟(51)Int.Cl.C12N1/19(2006.01)C12P23/00(2006.01)C12N15/01(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书55页页(54)发明名称一株高产天然虾青素的红法夫酵母菌株及其选育方法和应用(57)摘要本发明公开了一株高产天然虾青素的红法夫酵母菌株及其选育方法和应用，该菌株命名为红法夫酵母(Phaffiarhodozyma)CZ10，保藏号为CGMCCNo.6355。通过如下方法选育：选取亲本菌株，分为两组，分别进行LiCl-紫外复合诱变和60Co-γ射线诱变，筛选后若干株诱变株I和若干诱变株II；将诱变株I和诱变株II进行原生质体融合、再生和筛选，得到若干株虾青素产量高于诱变株I和诱变株II的融合菌株；将步骤(2)所得的融合菌株进行递归式原生质体融合，至少进行5轮，得到所述的红法夫酵母菌株。本发明的菌株应用于工业上生产虾青素，其虾青素产量达到68mg/L，相对选育前的亲本菌株提高了14.3倍。CN1028647ACN102864087A权利要求书1/1页1.一株红法夫酵母菌株，其特征在于，命名为红法夫酵母(Phaffiarhodozyma)CZ10，保藏号为CGMCCNo.6355。2.一种利用如权利要求1所述的红法夫酵母菌株生产虾青素的方法，其特征在于，包括：将所述的红法夫酵母(Phaffiarhodozyma)CZ10接种到发酵培养基中进行发酵培养，发酵完成后，提取所述虾青素。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的发酵培养基以1L计含有以下组分：10.0g葡萄糖，5.0g蛋白胨，5.0g浓缩酵母浸出粉，0.2gCaCl2·2H2O，2.75gMgSO4·7H2O，1.5gKH2PO4，3.0g(NH4)25O4，pH5.0。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养的温度为21～23℃。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养的时间为48-72h。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述提取虾青素的方法为：取发酵液，第一次离心、收集菌体，将菌体破碎，萃取、第二次离心，获得虾青素。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述萃取采用的萃取剂为丙酮。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述第二次离心的转速为4500～5000r/m。9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述菌体破碎的方法为：将所述菌体悬浮在预热后的二甲基亚砜中，振荡。10.一种如权利要求1所述的红法夫酵母菌株的选育方法，其特征在于，包括：(1)选取亲本菌株，分为两组，分别进行LiCl-紫外复合诱变和60Co-γ射线诱变，筛选后分别得到经LiCl-紫外复合诱变的若干株诱变株I和经60Co-γ射线诱变的若干诱变株II；(2)将所述的诱变株I和诱变株II进行原生质体融合、再生和筛选，得到若干株虾青素产量高于诱变株I和诱变株II的F-1代融合菌株；(3)将步骤(2)所得的F-1融合菌株进行递归式原生质体融合，至少进行5轮，得到所述的红法夫酵母菌株。2CN102864087A说明书1/5页一株高产天然虾青素的红法夫酵母菌株及其选育方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物发酵工程技术领域，具体涉及一株高产天然虾青素的红法夫酵母菌株及其选育方法和应用。背景技术[0002]虾青素(3，3′-二羟基-4，4′二酮基-β，β′胡萝卜素)是一种酮式类胡萝卜素，天然呈红色。虾青素最初被用做水产业的饲料添加剂，后来药理学和生理学研究表明虾青素有极强的抗氧化、淬灭自由基的功能，并能促进抗体的产生，增强宿主的免疫功能，在食品、医药和化妆品等领域有广阔的应用前景，具有很高的经济价值。[0003]红法夫酵母(Phaffiarhodozyma)是唯一天然可产虾青素的酵母，其反式虾青素已于2000年获得FDA批准，用于食品添加剂。它是真菌界、真菌门、半知菌亚门、隐球酵母科、红法夫酵母属的唯一种。作为虾青素的生产菌，红法夫酵母具有许多优势：可利用多种糖进行快速异养代谢，培养时间短，不需光照及可以实现高密度培养等。[0004]但野生型红法夫酵母(D