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杜氏盐藻无菌纯化研究
1.简介：
盐藻是一种单细胞真核生物，天然分布于盐湖和盐田等高盐环境中，也是重要的工业微生物。然而，随着对其应用越来越多，如糖化剂、生物柴油和饲料等，对其无菌纯化的要求也越来越高。因此，从杜氏盐藻(Dunaliellasalina)中分离无菌菌株变得至关重要，本文旨在综述目前关于杜氏盐藻的无菌纯化研究。
2.杜氏盐藻的特点：
杜氏盐藻是一种光合作用产生类胡萝卜素的微型生物，仅有1-10µm的大小，是近年来受到广泛关注的工业微生物。它生长温度适宜、对环境适应能力强，能在各种高、低盐度水质中生长。杜氏盐藻在产生大量的β-胡萝卜素和类胡萝卜素方面具有显著优势。这种微藻还被广泛用作生产糖等产业中的糖化剂、生产过量红细胞进行输血和制备抗氧化剂等。
3.分离无菌单株杜氏盐藻的研究现状:
目前，分离出无菌的杜氏盐藻不是显而易见的，只有很少的研究成功地单独分离出无菌菌株。无标准可供参照的分离技术和设备，导致了纯化过程涉及到的因素比较多。尽管提纯技术取得了一定的进展，但尚不完善。在大多数情况下，单独的微生物社区的识别和分离是一项非常具有挑战性的技术。
4.分离无菌单株杜氏盐藻的方法：
（1)无菌培养基的选择：
Dunaliellasalina需要高盐度的培养基，同时含有足够的营养物质和气体。无菌培养基通常需要与抗生素、放射性保护剂或其他化学物质相结合，因此是优秀的无菌技术的一个关键要素。
(2)纯化技术：
无菌培养基仅是杜氏盐藻无菌纯化的第一步，需要采用其他纯化技术构建从无菌生态中分离单株的步骤。最常用的两种技术是传统的表面光学显微镜和目前正被广泛研究和应用的现代分子生物学技术。
(3)分离纯化的步骤：
a.分离小规模杜氏盐藻样品进行手动操作。
b.选择较大的微囊，这可以通过使用透明的硅胶胶片进行筛选来完成。
c.使用大小为0.8~1µm的毛细管过滤膜过滤，通常使用具有0.2µm大小孔径的毛细管过滤膜。
d.在透明的硅胶胶片上使用镊子选择明显易于分离的微盘条。
e.使用长柄显微镜将适当的微盘移动到无菌培养基中。
f.增加营养成分以促进单株的生长，并控制营养成分，以使单株可以生长在无菌状态下。
综上所述，盐藻的应用日趋广泛，从杜氏盐藻中分离出无菌菌株也日趋重要。虽然目前分离无菌的困难仍然存在，但是各种分离技术的不断发展，为盐藻无菌纯化研究开辟了新的篇章。我们有理由相信，经过大家不懈的努力，未来盐藻无菌纯化的研究必将取得更为若干的成果。