与杜氏盐藻细胞抗盐能力相关的miRNA.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107058322A(43)申请公布日2017.08.18(21)申请号201710284159.4A01H5/00(2006.01)(22)申请日2017.04.26(71)申请人新乡医学院地址453003河南省新乡市红旗区金穗大道601号(72)发明人贾岩龙王喜成郭潇王绪娟王稳邱乐乐(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君(51)Int.Cl.C12N15/113(2010.01)C12N15/11(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/82(2006.01)权利要求书1页说明书3页序列表3页(54)发明名称与杜氏盐藻细胞抗盐能力相关的miRNA(57)摘要本发明涉及生物技术领域，具体公开了与杜氏盐藻细胞抗盐能力相关的miRNA，其序列选自SEQIDNO.1～SEQIDNO.16。可以选取其中的一个或多个进行杜氏盐藻抗盐活动的研究，并且还能够与目前已发现的miRNA一起用于定制芯片，鉴定所述miRNA是否表达，或检测所述miRNA表达量的高低，可用于藻类或植物耐盐抗逆性等研究。CN107058322ACN107058322A权利要求书1/1页1.与杜氏盐藻细胞抗盐能力相关的miRNA，其特征在于，其序列选自SEQIDNO.1～SEQIDNO.16。2.权利要求1所述miRNA的前体序列。3.编码权利要求2所述前体序列的DNA序列。4.权利要求1所述的miRNA在杜氏盐藻抗盐胁迫中的应用。5.权利要求1所述的miRNA在培育耐盐转基因植物中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述转基因植物中过表达所述miRNA或抑制所述miRNA的表达。7.检测权利要求1所述的miRNA的试剂。8.权利要求7所述的试剂在判断/检测杜氏盐藻细胞抗盐能力方面的应用。9.一种miRNA芯片，其特征在于，鉴定权利要求1所述的miRNA是否表达，或检测权利要求1所述miRNA表达量的高低。2CN107058322A说明书1/3页与杜氏盐藻细胞抗盐能力相关的miRNA技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及与杜氏盐藻细胞抗盐能力相关的miRNA。背景技术[0002]MicroRNA(miRNA)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其长度约为21-25个核苷酸。成熟miRNA的产生是由较长的初级转录本(pri-miRNA)经过一系列核酸酶的剪切加工而成的，随后组装进RNA诱导的沉默复合体，通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。研究表明miRNA参与了生命过程中多种重要进程，包括发育、细胞增殖和凋亡、细胞分化、脂肪代谢等等。目前在miRBase数据库中收录有人(Homosapiens)的pre-miRNA(miRNA前体)1881条，小鼠(Musmusculus)有1193条，大鼠(Rattusnorvegicus)有495条，莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)有50条，而在杜氏盐藻(Dunaliellasalina，D.salina)中发现的miRNA少之又少。杜氏盐藻是一种比较独特的高度耐盐单细胞真核生物，属绿藻门绿藻纲团藻目多睫毛科。杜氏盐藻细胞没有细胞壁，具双鞭毛而能游动，含有一个较大的杯状叶绿体能进行光合作用；可在含有0.05M-5MNaCl的盐水中生长，抗逆性极佳，是一种较为理想的抗逆境生物。杜氏盐藻细胞因含有丰富的β-胡萝卜素而具有独特经济价值。极其耐盐的能力、简单的细胞结构、便利的培养条件及丰富的营养价值使杜氏盐藻成为进行生物能源、耐盐抗逆性等研究的重要模式生物和遗传学研究的良好材料。miRNA具有物种和组织特异性，最近几年关于植物miRNA的各类研究越来越多，例如抗旱、抗盐等抗逆性研究。发明内容[0003]本发明以杜氏盐藻为研究对象，发现了一些在miRBase数据库中未被收录的预测miRNA，其核苷酸序列如SEQIDNO.1-16所示。经试验证实，其与杜氏盐藻细胞抗盐能力相关。[0004]因此，本申请提供了新的与抗盐胁迫相关的miRNA序列。[0005]在此基础上，所述miRNA的前体序列及其前体序列的编码序列也属于本发明的保护范围。[0006]经试验研究发现，前述miRNA的表达量受到盐胁迫的调节，且调节效果明显，说明其在杜氏盐藻适应高盐胁迫机制中发挥重要作用。[0007]所述试验研究具体为，通过对高盐(含3.0MNaCl)和低盐(含0.75MNaCl)培养条件下测序获得的杜氏盐藻样品小RNA序列进行数据分析并采用Fisher精确检验分析发现，上述mi