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一种高效提取焦化废水活性污泥总DNA的方法
引言
随着工业和城市化进程的发展，工业废水排放越来越多。焦化废水是一种典型的工业废水，其中含有较高浓度的苯、甲苯、乙苯、二甲苯等有机物，随着废水的排放导致水质严重污染。为了有效地解决焦化废水处理问题，利用活性污泥对废水进行生物处理成为一种有效方法，其中活性污泥的细菌丰富且代谢活跃，可降解焦化废水中的有机物质。而对于活性污泥的分子水平研究，则需要提取出其中的总DNA，以便进行PCR扩增和测序。本文就介绍一种适用于焦化废水活性污泥的总DNA提取方法。
材料和方法
1.实验材料
活性污泥样品、QIAampDNAStoolMiniKit（Qiagen公司）、琼脂糖、蛋白酶K、EDTA、Tris-HCl缓冲液、SDS、TE缓冲液等试剂。
2.总DNA提取方法
（1）提取活性污泥细胞
取活性污泥10ml，离心，去除超纯水后弃掉上清液。用20mMEDTA混合10ml活性污泥悬浮液离心，弃掉上清液。再用PBS混合10ml活性污泥悬浮液离心，弃掉上清液。将活性污泥细胞沉淀用液氮冷冻保存或直接用于后续实验。
（2）细胞裂解
将细胞沉淀加入3mlTE缓冲液，添加0.2ml非离子表面活性剂TritonX-100，混合静置1min，然后加入0.2mlSDS混合，混合摇晃10s，再加入5μl蛋白酶K（20mg/ml）混合液，室温孵育30min。
（3）DNA纯化
采用商用试剂QIAampDNAStoolMiniKit对上述裂解液进行纯化。将裂解液（约500ul）转移至DNAmini柱中，以14000rpm离心2min，将底部的纯化产物收集到新的2ml离心管中。重复两次，以去除其余裂解液及其他杂质。将40-60ul的去离子水加入柱上产物中，放入65℃水浴中60min使其离子溶解，混合均匀，最后在柱上离心2min，收集纯化的DNA产物。
（4）DNA电泳分析
将纯化后的DNA样品利用琼脂糖凝胶电泳进行分析，具体步骤为：首先调制1%琼脂糖缓冲溶液，并将其加入电泳槽中；然后将所得DNA样品按照约10ul/孔的体积加入琼脂糖缓冲溶液中的每个孔中，并在电泳仪上进行电泳分析。最后通过特定的DNA标记物（如双染料标记DNA标准品）对其进行DNA条带的定性定量分析。
结果与讨论
通过以上方法，得到了总DNA纯度和产量良好的活性污泥DNA提取产物。纯化后的DNA产物通过琼脂糖凝胶电泳分析，可见其中产生了大约30-40条的浅色线条，长度在100bp至50kb之间，表明所得DNA含有高分子量的基因组DNA。并且，该提取方法的DNA产量能够满足PCR扩增和测序的需求，进一步验证其适用于焦化废水活性污泥的总DNA提取。
总结
本文介绍了一种适用于焦化废水活性污泥的总DNA提取方法，并在实验中得到了良好的提取效果。该提取方法具有优良的纯化效果和高产量，且过程简便，适用于焦化废水活性污泥的分子水平研究。对于后续的PCR扩增和测序，本实验所得的纯化DNA产物也具有很好的质量和数量性能，可用于高通量测序等研究。