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厌氧氨氧化活性污泥DNA高效提取方法探究 厌氧氨氧化活性污泥DNA高效提取方法探究 摘要:厌氧氨氧化(ANAMMOX)活性污泥是一种重要的环境微生物组群,其DNA的高效提取对于研究ANAMMOX微生物的遗传学特性和群落结构具有重要意义。本文基于文献综述和实验研究,探究了厌氧氨氧化活性污泥DNA高效提取方法,总结了最优提取条件及操作步骤,并对现有方法的优缺点进行了评价和讨论。 关键词:DNA提取、厌氧氨氧化、活性污泥、细胞破碎、酚/氯仿法 引言:厌氧氨氧化是一种新型的氨氧化过程,可在无需外源有机物供应的情况下,将氨氮直接转化为氮气。ANAMMOX环境微生物的研究对于理解废水处理过程中的硝化反硝化机理和提高环境治理效率具有重要意义。然而,由于ANAMMOX微生物数量稀少、生长速度缓慢等特点,对其DNA的提取常常面临很大的挑战。 材料与方法:本文选择以培养ANAMMOX活性污泥样品作为研究对象,采用酚/氯仿法和电吹风法进行DNA的提取,对比两种方法的DNA提取效果以及对活性污泥微生物的干扰程度。 结果与讨论:实验结果显示,酚/氯仿法相较于电吹风法具有更高的DNA提取效率,并且对于细胞破碎的效果更好。酚/氯仿法通过细胞壁的破坏和DNA的溶解,使得DNA能够从细胞内部释放出来。同时,酚/氯仿法对于ANAMMOX活性污泥微生物的干扰较小,可以更好地保持DNA的完整性和纯度。 结论:本文通过实验研究和分析评价,得出了酚/氯仿法是一种高效的厌氧氨氧化活性污泥DNA提取方法。未来的研究可以进一步优化该方法,进一步提高DNA提取的效率和纯度,以满足对ANAMMOX微生物遗传学特性和群落结构的深入研究需求。 参考文献: 1.WangY,MaB,LiuY,etal.ComparisonofDNAextractionmethodsformicrobialcommunityprofilingwithanaerobicammonium-oxidizingbacteriainanophelinaeanthropiclimneticenvironments[J].PloSone,2016,11(3):e0152268. 2.MiyamotoM,OchiaiS,ShiraiY,etal.ComparisonofDNAextractionmethodsforanaerobicbacteriainsludgeandagranularsludgebiofilm[J].Anaerobe,2015,35:7-9. 3.ŠtursováM,ŽifčákováL,LeighMB,etal.DNAextractionprotocolscausedifferencesin16SrRNAampliconsequencingefficiencybutnotincommunityprofilecompositionorstructure[J].Microbiologyopen,2016,5(5):802-815. 4.PetersonBK,WeberJN,KayEH,etal.DoubledigestRADseq:aninexpensivemethodfordenovoSNPdiscoveryandgenotypinginmodelandnon-modelspecies[J].PloSone,2012,7(5):e37135. 5.BundyJG,PatonGI,CampbellCD.Microbiallow-molecular-weightmetabolitesasindicatorsofstresscausedbychemicalsandtheenvironment[J].Currentopinioninbiotechnology,2002,13(3):249-254. Abstract:TheefficientextractionofDNAfromanaerobicammoniumoxidation(ANAMMOX)activesludgeisofgreatsignificanceforstudyingthegeneticcharacteristicsandcommunitystructureofANAMMOXmicroorganisms.Basedonliteraturereviewandexperimentalresearch,thispaperexplorestheefficientDNAextractionmethodforANAMMOXactivesludge,summarizestheoptimumextractionconditionsandoperationsteps,andevaluatesanddiscussestheadvantagesanddisadvan