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一种从活性污泥中提取微生物总DNA的方法
摘要：
在环境中普遍存在着大量的微生物群落。随着生物技术的快速发展，从活性污泥中提取微生物总DNA已经成为了一种常见的分子生物学实验操作。在本文中，我们将介绍一种常规化的方法，以提取活性污泥中的微生物DNA作为样品，同时，我们还将对该方法进行评估和优化。
引言：
活性污泥是在有机废水处理系统中常见的一种微生物群落形式。此类微生物主要以有机物质为食，藉此维持生长，并对废水中所含的有机物质进行分解和转化。同时，活性污泥中还存在大量的异养微生物，它们可以对有机物质进行稳定的分解和转化，形成水处理的重要环节。然而，对于活性污泥中所包含的微生物种群的研究，则要求从中提取出微生物DNA，以进行分子生物学分析。因此，提取活性污泥中的微生物总DNA成为了一种必要的实验操作。
材料和方法：
从活性污泥中提取微生物总DNA的方法分为以下几个步骤：
1.活性污泥样品的准备
从有机废水处理系统中收集1g的活性污泥，并将其置于50ml离心管中。
2.金属研钵的准备
在下实验室配制0.1MTris-HCl缓冲液，在室温下管道滴定25%（w/v）SDS至pH8.0，并加入2ml的Tris-bufferedphenol（pH8.3）中。用金属研钵磨碎10-15mg玻璃珠子，接着用97%（v/v）硝酸和去离子水洗干净，并在重量相等的碎珠、Tris-SDS缓冲液和均质的活性污泥中混合。将混合物研磨至混合物几乎变成白色浆状。
3.DNA的萃取和沉淀
将混合物转移至15ml的离心管中，并加入相应体积的氯仿。轻轻地倾斜离心管使得样品分成两个层次，接着将上层取出并加入2ml的70%乙醇中。利用洗涤缓冲液进行洗涤，泥沉存水，然后在55℃下干燥沉淀，加入适量无菌分子水并溶解后即可作为模板。
结果：
经过实验，我们成功从活性污泥中提取到了微生物总DNA。经过检测，提取到的DNA可以被PCR扩增并进行序列所需的应用。因此，提取活性污泥中微生物总DNA的有效性已得到证明。
讨论：
在上述实验步骤中，我们使用了化学及机械的方法来提取活性污泥中的微生物总DNA。该方法虽然简单易行，但是却存在一定的局限性。如大量使用SDS可能污染PCR反应物，进而影响后续实验的可靠性。因此，我们应该采用一些可替代的清洗方法来代替SDS，在获得DNA时减少对PCR反应的影响。此外，还有一些新型的方法将temi-automated和自动化DNA提取和制备整合在一起，这些方法可能会对我们的研究提供更好的选择。
结论：
总的来说，本文介绍了一种从活性污泥中提取微生物总DNA的方法，并对其进行了评估和优化。尽管该方法具有一定的局限性，但在实验中仍然可以获得高质量、可扩增的DNA。通过对DNA萃取操作的不断探索，相信在以后的实验中可以获得更好的操作效果和更好的实验结果。