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具有抗稻瘟病菌活性的链霉菌ⅠT2菌株的分离鉴定及其attB位点的分析
摘要
本文对具有抗稻瘟病菌活性的链霉菌ⅠT2菌株进行了分离鉴定及其attB位点的分析。通过形态学及分子生物学鉴定，确认该菌株为链霉菌属，编号为ⅠT2。进一步对其进行抗菌活性筛选，发现该菌株具有对稻瘟病菌的抑制作用。使用PCR技术扩增attB位点序列，确定ⅠT2菌株具有该位点，为后续的基因克隆及代谢途径研究提供了基础。
关键词：链霉菌；稻瘟病菌；抗菌活性；分离鉴定；attB位点
Abstract
ThispaperisolatedandidentifiedanewstrainofStreptomyces,namedⅠT2,whichhasanti-bacterialactivityagainstRiceblastfungus.MorphologicalandmolecularbiologyidentificationconfirmedthatthisstrainbelongstoStreptomyces.Furtherscreeningfoundthatthestrainhasinhibitoryeffectsonriceblastfungus.UsingPCRtechnologytoamplifytheattBsitesequence,itwasdeterminedthattheⅠT2strainhasthissite.Thisprovidesapreliminarybasisforsubsequentgenecloningandmetabolicpathwayresearch.
Keywords:Streptomyces,Riceblastfungus,Antibacterialactivity,Identification,attBsite
1.引言
稻瘟病是世界上最为重要的水稻病害之一，严重影响了全球的粮食产量和质量。传统的化学农药防治方法在防治稻瘟病上存在许多问题，因此寻找天然的抗菌物质成为一种重要的研究方向。链霉菌属是一类广泛存在于土壤中的革兰氏阳性细菌，其能够产生各类天然有机化合物，具有许多生物活性。因此，链霉菌属成为天然抗菌物质的重要来源之一。
本研究旨在分离筛选具有抗稻瘟病菌活性的链霉菌菌株，并分析其attB位点序列，为后续的基因克隆及代谢途径研究提供基础。
2.材料和方法
2.1链霉菌菌株的分离与鉴定
从土壤中分离链霉菌，按照传统的分离鉴定方法进行，并对形态学进行鉴定。同时，将菌株进行16SrDNA测序，进行分子鉴定。
2.2抗菌活性的筛选
选取具有抗稻瘟病菌活性的菌株，通过叶片切片抑制法进行抗菌活性的测定。
2.3attB位点的扩增
使用PolymeraseChainReaction（PCR）技术扩增attB位点序列。PCR反应体系为：10×PCR缓冲液2μL,MgCl21.5mmol/L，dNTPs0.3mmol/L，引物F/R各0.5μL，DNA模板2μL，蒸馏水15.5μL，TaKaRaExTaqG80.2μL，共50μL。反应条件为：预变性5min，94℃2min；（94℃30s，54℃20s，72℃1.5min）*30次；72℃10min；4℃保藏。
3.结果
3.1菌株的分离和鉴定
从土壤中分离出一株能够形成菌丝、孢子，表现出链霉菌属的典型形态特征，且16SrDNA序列与其他链霉菌属有97%以上的相似性，被鉴定为链霉菌属菌株，编号为ⅠT2。
3.2抗菌活性的筛选
在采用叶片切片抑制法进行抗菌筛选时，发现ⅠT2菌株具有较好的抗菌活性，其对稻瘟病菌产生很强的抑制作用。
3.3attB位点的扩增
使用PCR技术对ⅠT2菌株进行attB位点扩增，可得到了目标段500bp的DNA片段。结果见图1。
图1attB位点PCR结果
4.讨论
本文成功分离并鉴定出能够抑制稻瘟病菌的链霉菌菌株ⅠT2，并通过PCR技术扩增出其attB位点的DNA序列。该结果为后续的基因克隆及代谢途径研究提供基础。
5.结论
本文分离成功抗稻瘟病菌的链霉菌菌株ⅠT2，并扩增出其attB位点的DNA序列，为后续的基因克隆及代谢途径研究提供了基础。
参考文献
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