实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用.pdf

第41卷第8期东北农业大学学报41(8):148~155

2010年8月JournalofNortheastAgriculturalUniversityAug.2010

实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用

陈旭，齐凤坤，康立功，李景富

（东北农业大学园艺学院，哈尔滨150030）

摘要：实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针，利用荧光信号积累实
时监测整个PCR反应进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析，具有操作简便、快速高效，高通
量，而且高敏感性等特点，该技术在分子诊断、分子生物学研究、动植物检疫以及食品安全检测等方面有广
泛的应用。文章对实时荧光定量PCR的原理、影响因素以及在植物病害和遗传育种方面的应用等进行了
综述。
关键词：实时荧光定量PCR；分类；影响因素；应用
中图分类号：Q503文献标志码：A文章编号：1005-9369（2010）08－0148－08

Advanceandapplicationofreal-timefluorescentquantitativePCR/CHEN
Xu,QIFengkun,KANGLigong,LIJingfu(CollegeofHorticulture,NortheastAgriculturalUniversity,
Harbin150030,China)

Abstract:Real-timefluorescentquantitativePCR,inPCRreactionsystembyaddingfluorescent
dyesorfluorescentprobes,real-timemonitoringoffluorescencesignalaccumulationprocessofthePCR
reaction,standardcurvebyquantitativeanalysisoftheunknowntemplate,simple,fast,efficient,
high-throughputandthecharacteristicsofhighsensitivity.Thetechnologyinmoleculardiagnostics,
molecularbiology,animalandplantquarantineandfoodsafetytestinghasawiderangeofapplications.
Articleontheprincipleofreal-timefluorescentquantitativePCR,factorsandplantdiseasesandgenetic
breedingoftheapplicationwerereviewed.
Keywords:real-timefluorescentquantitativePCR;classification;factors;application

自1985年，美国Perkin-ElmerCetus公司人类控PCR反应的进程，根据PCR反应的数学函数关
遗传研究室Mullis等发明了具有划时代意义的聚合系，结合相应的算法，通过加入标准品的方法，就
酶链反应（Polymerasechainreaction,PCR），使人们可以对待测样品中的目标基因进行准确定量。但
梦寐以求的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现Higuchi利用的是嵌入荧光染料检测，它只能简单
实，但是，利用传统的PCR技术进行检测鉴定时，地反映PCR反应体系中总的核酸量，是一种非特
需要进行扩增反应后的电泳分离及染色处理，且不异性的检测方法。直到1995年，美国PE公司研制
能准确定量，使其应用受到限制[1]。1992年，Hi-成功具有革命性意义的荧光定量PCR技术，融合
guchi最早提出了实时PCR的设想[2]，它的基本思了PCR高灵敏性、DNA杂交的高特异性和光谱技
想是利用荧光染料EB（溴化乙锭）可以插入到双链术的高精确定量等优点，直接探测PCR过程中荧
核酸中受激发光的性质，在PCR反应的退火或延光信号的变化，以获得特定区段扩增产物定量的结
伸时检测掺入到双链核酸中EB的含量就能实时监果，不需要PCR后处理或电泳检测，完全闭管操

收稿日期：2010-01-19
基金项目：国家支撑计划项目（2006BAD01A7-3-02）
作者简介：陈旭（1981-），男，实验员，硕士研究生，研究方向为园林植物育种。E-mail:[e-mail]
第8期陈旭等：实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用·149·

作（整个过程中仅有加入样品的一次开盖），一举克每一个循环扩增产物的变化，可以对初始模板量
服了常规PCR技术的诸多难题。具有诸多优点：进行定量分