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高效液相色谱测定肉制食品中五种邻苯二甲酸酯
资料来源：中国增塑剂网

王美丽，陈海婷，张会娜，郭智勇，魏丹毅
(宁波市新型功能材料及制备科学国家重点实验室培育基地，宁波大学材料科学与化学工程学院，宁波315211)

摘要:建立了肉制食品中5种邻苯二甲酸酯类增塑剂(PAEs)含量的检测方法。样品用正己烷提取，C18柱分离，柱温35.0℃，乙腈-水为流动相梯度洗脱，流速1.0mL/min，紫外检测波长226nm。5种PAEs分离特异性好，在0.02~10μg/mL之间均具有较好的线性关系，检出限在4.4~13.8ng/mL之间，高、中、低3水平的回收率均在79.5%~102.0%之间，相对标准偏差均在1.1%~14%之间。方法适用于肉制食品中邻苯二甲酸酯类的检测。
关键词：邻苯二甲酸酯；高效液相色谱；肉制食品

食品容器和包装材料增塑剂包括邻苯二甲酸酯类(PAEs)、己二酸酯类(AEs)等。增塑剂与塑料间并没有严密的化学结合键，故很容易进入环境。近年的研究表明：PAEs和AEs在体内长期累积，可致畸、致癌和致突变[1,2]。因此，增塑剂的分析检测受到重视，尤以PAEs为研究对象居多。目前，PAEs的检测技术主要采用薄层色谱法[3]、气相色谱法[4~6]、液相色谱法[7~14]、气-质联用法[15,16],样品处理技术主要有液-液萃取[3,8,14,15]、固相萃取[4,5,9,11,16]以及固相微萃取[6,7,12,15]等,涉及的基体主要为PVC塑料[3,4,6,15]、环境样品(如水、泥土)[5,8,13,16]、组织和血浆[7,8,10,15]、食品[12,14]等。食品因直接被摄入而危害更大，报道过的研究对象主要包括：水产品、牛奶、食用油等。肉制食品的脂肪含量高，PAEs在其中的溶出程度尤为严重，但至今未见相关检测方法报道。本文以邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸正二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸正二辛酯(DOP)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(DEHP)等5种PAEs为研究对象,建立了高效液相色谱法测定肉制食品中PAEs的方法。方法重现性好，准确度高，可用于肉制食品中此类物质的测定，也可用于生产企业的质量控制。
1实验部分1.1仪器与试剂戴安P680C高效液相色谱仪，包括：P680型四元梯度泵，TCC-100型柱温箱，ASI-100型自动进样器，UVD170U型紫外检测器，Chromeleon色谱工作站；AB104-N型电子天平；XHF-D型高速分散器；SK-1型涡旋混匀器；DS180A型超声波清洗机；HeraeusPrimoR高速冷冻离心机；D10-12型氮气吹扫仪；HealForcePW超纯水系统。DEP、DBP、DEHP、DOP标准品(Sigma-Aldrich)，BBP标准品(TCI)，乙腈(HPLC级)、正己烷(Fisher)，水为超纯水。
1.2色谱条件色谱柱：PhenomenexLunaC18柱(250mm×4.6mmi.d.，5μm)；预柱：PhenomenexC18柱(4mm×3mm，5μm)；紫外检测波长；226nm；柱温:35.0℃；进样体积20μL；流动相：乙腈-水；流速：1.0mL/min；梯度洗脱，步骤如下表1所示。

1.3标准溶液配制
分别称取DEP、BBP、DBP、DEHP、DOP标准品各0·0500g，分别用乙腈定容于50mL容量瓶中，配成1mg/mL的5种PAEs的储备液。准确移取5种PAEs的储备液各100.0μL，置于同一10mL容量瓶中，用V(乙腈)∶V(水)=75∶25的混合溶液定容,配成10.0μg/mL的混合标准应用溶液。再用水逐级稀释，配成2.0、1.0、0.20、0.10、0.020、0.010μg/mL的混合标准应用溶液。1.4样品处理准确称取已切碎的火腿肠0.5g于试管中，加入正己烷2mL，匀浆，涡旋振摇3min，超声提取15min，在-10℃下10000r/min离心10min，取清液；同法再萃取1次，合并2次清液，45℃下氮气流吹干，用乙腈0.5mL溶解残渣，经0.45μm微孔滤膜过滤后，进样。以生产日期不超过15天，距离表面1cm以上的内层肉制品作为空白。
2结果与讨论2.1色谱条件的选择PAEs在205、226和272nm处有3个特征吸收峰，吸收强度依次增大，但272nm处杂峰干扰较多，综合考虑吸收强度及干扰因素，选择226nm作为检测波长。以纯乙腈作为流动相时，BBP和DBP、DEHP和DOP两两未能达到完全分离，增加流动相中水的含量，5种PAEs能完全分离，但DEHP和DOP的出峰时间增长，当以V(乙腈)∶V(水)=75∶25的流动相等度洗脱时，DOP的出峰时间超过了50min，故考虑采用梯度洗脱。在如表1所示条件下