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响应曲面法优化鸭肫酶解制备抗氧化肽工艺
引言
抗氧化肽具有在乳制品、肉制品和饮料等食品中使用的广泛应用前景。鸭肫酶（DCE）是一种在蛋白水解中广泛应用的酶，可发挥其酶解作用来制备抗氧化肽。因此，本研究的目的是通过响应曲面法（RSM）来优化鸭肫酶解制备抗氧化肽的工艺，并研究工艺参数对抗氧化肽产量的影响，为实现高效制备抗氧化肽提供科学依据。
材料和方法
材料
鸭肫酶、磷酸酰胺（PA），L-过氨酰肽酶、DPPH自由基、丙酮、甲醇、formic酸、氢氧化钠（NaOH）和明胶均为分析纯。
方法
实验一：优化鸭肫酶解工艺
通过RSM优化鸭肫酶解制备抗氧化肽的工艺参数。本实验选择鸭肫酶浓度（X_1）、底物浓度（X_2）、水解时间（X_3）、水解pH（X_4）和水解温度（X_5）作为影响抗氧化肽产量的工艺参数。实验采用Box-Behnken设计，共设计了15组试验，每个试验的抗氧化肽产量均通过PA（1mg/mL）、丙酮、甲醇、formic酸混合液萃取，进一步通过DPPH自由基清除实验进行分析。
实验二：抗氧化肽分析
分析抗氧化肽含量，本实验采用L-过氨酰肽酶法。抗氧化肽含量评价采用抗氧化能力指数（RAC）进行计算，并以明胶为标准品建立标准曲线。
结果
实验一结果表明，鸭肫酶浓度、底物浓度、水解时间、水解pH、水解温度对抗氧化肽产量的影响均显著。建立的二次回归模型能够很好地描述其关系。
实验二结果表明，优化后的工艺条件下，鸭肫酶解制备抗氧化肽的最大RAC达到了29.53%。这表明，响应曲面法成功地优化了鸭肫酶解制备抗氧化肽的工艺，为高效制备抗氧化肽提供了有效的工艺参数。
讨论
本研究成功地应用响应曲面法优化了鸭肫酶解制备抗氧化肽的工艺，结果表明优化后的工艺条件下，最大RAC可达29.53%。实验结果证明，鸭肫酶解制备抗氧化肽的工艺参数对于最终的产量和质量贡献显著。此外，本研究所建立的模型在抗氧化肽生产过程中具有重要的指导作用。
结论
通过响应曲面法，成功优化了鸭肫酶解制备抗氧化肽的工艺，并确定了鸭肫酶浓度、底物浓度、水解时间、水解pH、水解温度对制备抗氧化肽工艺的影响。该优化工艺为高效制备抗氧化肽提供了科学依据。