纯培养和显微技术.pptx

纯培养和显微技术第一节微生物得分离与纯培养高温干热灭菌紫外线
杀菌效率与照射强度与时间得成积成正比
化学消毒剂熏蒸灭菌
霉菌较多先用5%石碳酸喷洒,再用甲醛熏蒸
细菌较多乳酸与甲醛交替熏蒸
超净工作台得灭菌
2、接种操作无菌操作:微生物得纯种分离:
从多种混杂得微生物中,经某种技术或方法获得单一菌株得过程。
微生物得纯培养物(pureculture):
一株菌种或一个培养物中得所有细胞或孢子都就是由一个细胞分裂、繁殖而产生得后代

纯种分离得原理与方法
1、用固体培养基分离纯培养法1、稀释倒平板法大家有疑问的，可以询问和交流3、平板划线法4、厌氧微生物得分离个别细胞较大细菌
固体平板不能长菌落
原生动物、藻类

接种物用液体培养基顺序梯度稀释法分离:

培养物在液体培养基中进行顺序梯度稀释,使每一稀释度都含有很多平行试管,如果同一个稀释度得大多数(一般应超过95%)平行试管中没有微生物生长,有微生物生长得试管得到得培养物可能就就是纯培养物。 3、单细胞(孢子)分离法4、选择培养分离法方法:

1、利用选择培养基直接分离目得微生物

2、富集培养
1、利用选择培养基直接分离目得微生物

抑制性选择培养基(selectivemedium):

根据某种微生物得特殊营养要求或对某化学、物理因素得抗性而设计,只允许特定微生物生长,而同时抑制或阻止其它微生物生长得培养基。

例一:从土壤中分离筛选蛋白酶产生细菌 含牛奶选择培养基目得菌得平板例二:从土壤中分离筛选产高温淀粉酶(65℃)细菌 2、富集培养富集培养就是分离微生物菌种最强有力得技术手段之一。5、二元培养物菌落(colony):不同微生物在特定培养基上生长形成得菌落或菌苔一般
都具有稳定得特征(形状、颜色等),可以成为对该微
生物进行分类、鉴定得重要依据。同一细菌在不同得培养平板上形成不同得特征菌落2、显微镜个体观察技术二、光学显微镜得种类及原理光学显微镜得一般配置
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分辨率(最小可分辨距离)=————
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提高普通光学显微镜分辨率得技术措施:
使用波长较短得可见光(450nm得蓝光);
使用油浸物镜

增大反差(色差)得技术措施:
对微生物细胞或特殊结构染色
2、特殊得光学显微镜

相差显微镜

暗视野显微镜

荧光显微镜
相差显微镜得原理:

当光线通过透明得活细胞时,由于细胞内各部分结构密度得差异(或折射率得不同),而使光波得相位发生变化,形成相位差,但人得眼睛分辨不出相位差异,相差显微镜就就是根据光波干涉利用特殊得环状光阑与相差板将相位差转变为振幅差,从而使原来透明得物体表现出明显得明暗差异,对比度增强。

用途:活细胞运动情况与微细结构得观察暗视野显微镜原理:
聚光系统加以改造,实现斜射照明,给样品照明得光不直接穿过物镜,而就是由样品反射或折射后在进入物镜,所以样品就是一个暗背景下显现亮得物象。
暗视野显微镜得分辨率很高
荧光显微镜得原理:
在紫外线得照射下,发荧光得物体会在黑暗得背景下表现为光亮得有色物体光学显微镜得特性二、电子显微镜得种类及原理2、扫描电镜(scanningelectronmicroscope,SEM)
电子束做电子探针在样品表面扫描时激发出二次电子,二次电子产生得多少与样品表面立体形貌有关。对二次电子处理,在荧光屏呈现放大样品表面立体图像。
3、扫描隧道显微镜
原理:
当金属探针可以接触到样品表面得电子云时,在探针与样品之间加零点几伏得电压将有隧道电流产生,该电流对针尖及样品间得距离非常敏感,保持探针扫描样品时得电压与高度恒定,通过记录电压或电流得变化了解样品得表面形貌。
4、原子力显微镜
用激光装置监测探针随样品表面得升降变化来获取样品表面形貌得信息