微生物的纯培养和显微技术.pptx

会计学//培养物（culture）:
指在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体。

纯培养物（pureculture）：
微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代，称纯培养。所得培养物成为纯培养物。第一节微生物的分离和纯培养一、无菌技术(aseptictechnique)1、微生物培养的常用器具及其灭菌/火焰灼烧法
干热灭菌法
烘箱内热空气灭菌法

高温灭菌巴氏消毒法
常压下煮沸消毒法
间歇灭菌法
湿热灭菌法
常规加压灭菌法
加压下
连续加压灭菌法高压蒸汽灭菌锅2、接种操作/双管移植法二、用固体培养基分离纯培养指熔化的固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛有固体培养基的平皿。/几种菌落/用接种环沾少许待分离的材料，在培养基表面进行多次平行划线，使微生物细胞分开生长以获得微生物纯培养的过程。/
a:用接种环取一滴或少量待培养物在1处划线，接种环灭菌后,转动平板在2处划线,再对接种环灭菌后在3处划线。

b:对平板培养后各处的菌落情况。///2、倾注平板法（pourplate）3、涂布平板法（spreadplate）倾注平板法/先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右，将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇匀，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。培养后，菌落形成在琼脂柱的中间。/三、用液体培养基分离纯培养(常用稀释法)四、单细胞（孢子）分离采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养的方法。该方法要在显微镜下进行。
毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。
显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获得纯培养。
小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。
/五、选择培养分离///六、微生物的保藏技术//////菌种保藏方法1、传代培养保藏2、冷冻保藏3、干燥保藏法沙土管保存冷冻真空干燥保藏//第二节显微镜和显微技术分辨率:指能辨别两点之间最小距离的能力。

反差:指样品区别于背景的程度。一、显微镜的种类及原理

1.普通光学显微镜(复式显微镜)
机械装置:镜座、支架、载物台、调焦螺旋等
光学系统:物镜、目镜、聚光镜等

使用油镜时加镜油的目的:
(1)增加照明亮度
(2)增加显微镜的分辨率
2.暗视野显微镜

主要用于观察
生活细菌的运动性。3.相差显微镜

通过环状光阑和相差板，利用光的干涉现象，将光的相位差转变为人眼可以察觉的振幅差(明暗差)，从而使原来透明的物体表现出明显的明暗差异，对比度增强。4.荧光显微镜
在紫外线的照射下，发荧光的物体会在黑暗的背景下表现为光亮的有色物体。5.透射电子显微镜(TEM)

6.扫描电子显微镜(SEM)

7.扫描隧道显微镜(STM)二、显微观察样品的制备///第三节显微镜下的微生物不同光镜照片(用四种不同技术制得的纤毛虫)

a:明视野显微镜;b:暗视野显微镜;c:相差显微镜;d:Nomarski显微镜光镜照片(啤酒酵母属面包酵母细胞)

a:明视野显微镜b:相差显微镜c:暗视野显微镜光镜照片(正在大量繁殖面包酵母细胞)
a:明视野显微镜b:暗视野显微镜光镜照片(纤毛虫的活细胞)

a:明视野显微镜(x100);
b:暗视野显微镜(x110);
c:相差显微镜(x100)光镜照片
(a:两端生鞭毛的大肠杆菌;暗视野显微镜;b:紫色红螺菌;相差显微镜)电镜照片(淋巴细胞)
(a:透射电镜;淋巴细胞薄片二维内部结构;b:扫描电镜;三维表面结构)电镜与光镜照片(正在进食的纤毛虫)一、填空
1、无菌技术包括__________、___________无菌和__________技术。
2、最常用的灭菌方法有__________、__________和___________等。
3、纯种分离方法通常用__________、___________、_____________、___________，其中，要测定食品中细菌的总数时，被测样品加入培养皿时应采用____________方法。
4、通常采用____________和____________方法来分离自然界中混杂微生物中只占少数的特定有用微生物，其原理是根据________________________。
5、微生物菌种保藏的原理是在____________、____________、____________、__________、____________等环境条件下，使其处于代谢不活泼状态。
6、____________和____________是决定显微观察效果的一个重要因素，而____________又是决定物镜性能的最重要指