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点击file→open→任意一张图点击再点击，左右鼠标键可改变图片大小，以便分析，图片大小不影响数据。点击再点倒数第二项，减去背景，保存原设置值。点击再点invert点击再点setmeasurements,勾选如下Ok确定MeanGrayValue:平灰度值IntegratedDensity:总灰度值点击，在区域内可改变大小，最好刚刚圈住每个印记，不改变方框大小，移到旁边黑色区域，计算背景面积点击，measure再把方框移到每个组别，仍点击所有值将会依次出现，如果中间改变方框大小，那么必须再重新将方框移到
2024-11-04
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Western操作步骤.doc
HYPERLINK"http://item.feedsky.com/~feedsky/bioask/~7968662/370429895/6078496/1/item.html"Western-Blot操作流程及个人心得体会（二）fromHYPERLINK"http://www.google.com/reader/view/feed/http%3A%2F%2Ffeed.bioask.cn%2F"\t"_blank"生物问问我的生物博客Western操作步骤（一）蛋白样品制备（1）单层贴壁细胞总
2024-08-15
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western实验步骤.docx
westernbolt实验操作步骤中心实验室内部文件WESTERNBLOT操作步骤聚丙烯酰胺凝胶电泳灌胶：注意：Acrylamide（聚丙烯酰胺）剧毒，需戴手套操作。1、将玻璃板用清洗剂洗干净后，自来水冲洗干净，蒸馏水冲洗三遍（勿用酸泡）。2、固定好玻璃板，配置分离胶溶液(10ml两板，一板可以减半配制)根据分子量选择相应浓度的分离胶。胶浓度超纯水凝胶储备液Gelbuffer※PH8.810%SDS10%APSTEMED10%常用4.1ml3.3ml2.5ml0.1ml50µl15µl12%小分子量3.4
2024-08-22
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Western实验步骤.doc
一、样品制备对于WesternBlotting实验而言，样品处理是关键步骤之一，获得的蛋白样品必须均质、可溶，并解离成单个多肽亚基，且尽量减少相互间的聚集，使其最终仅依赖本身的分子量大小进行分离。当目标蛋白的含量很低时，需要选取目标蛋白含量较高的组织或细胞器（如核抽提物），或者通过免疫沉淀等方式进行富集。通常样品有重组蛋白、细胞和组织等。1.样品收集1）培养的细胞贴壁和悬浮细胞收集方式不同，细胞裂解液种类各异，推荐含SDS的凝胶加样缓冲液裂解，煮沸即可。2）动物组织与细胞不同，组织块由于体积较大，须预先经
2024-09-03
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Western blot实验步骤.doc
Westernblot实验步骤SDS-PAGE做胶前的准备1)检查是否有足够的、干净的玻璃板、梳子和制胶架。2)检查是否有新鲜的、足量10%APS，没有就立刻重配。3)按将要检测的抗体对应的原始抗原的分子量大小，计算出胶的浓度，并算出分离胶各组分的用量。（一般使用12%和7.5%）4)提前一天配制好转印缓冲液，4℃预冷过夜制胶，电泳1）装置胶架a．玻璃板凹面朝里，底部对齐至于架子上。b．按正确方向安上楔子，先不压紧。c．将两侧边扣扣紧。d．双手同时均匀用力，分别将两侧楔子向下压紧。e．检查是否密封。2)按
2024-09-17
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