HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量.docx

描述：目的测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，为止咳定喘丸的质量研究提供依据。方法采用高相液相色谱（HPLC）法测定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量；使用AgilentSB-C18（4.6m...
[摘要]目的测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，为止咳定喘丸的质量研究提供依据。方法采用高相液相色谱（HPLC）法测定止咳平喘丸中苦杏仁的活性成分苦杏仁苷的含量；使用AgilentSB-C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；以乙腈-0.1%磷酸（8∶92）为流动相，流量1.0ml/min。结果建立了HPLC法测定止咳定喘丸中苦杏仁苷的含量，苦杏仁苷进样量在0.0824～2.0600μg范围内，线性关系良好（r=0.9995），平均回收率为99.03%，RSD=2.25%（n=6）。结论该方法准确、重复性好，可用于止咳平喘丸的质量控制。止咳平喘丸由苦杏仁（炒）、麻黄、石膏、紫苏子（炒）、厚朴（姜制）、陈皮、罂粟壳（蜜炙）、甘草、茶叶等中药材加工制成的复方纯中药制剂，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准中药方成制剂第三册》。功能主治：清热宣肺，止咳平喘。用于咳嗽气喘，久咳不止。该药原标准过于简单，标准中只对其性状和检查项确定了检验标准，无其他检定方法，对其产品的内在质量无法控制。为控制止咳平喘丸的质量，本实验采用高效液相色谱（highperformanceliquidchromatography，HPLC）法拟建立止咳平喘丸的质量控制方法，为该制剂的质量控制提供方法，为定量指标提供依据。1材料与方法1.1实验仪器岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包括LC-2010型紫外检测器）；LCSolution色谱工作站。1.2试剂与试药乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为超纯水。苦杏仁苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110820-200403）；止咳定喘丸（东芝堂药业有限公司，批号：130203、130303、130403）。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱AgilentSB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（8∶92）；柱温：30℃；体积流量：1.0ml/min；检测波长207nm；进样量10μl。理论板数：按苦杏仁苷计算应不低于7000，外标法计算含量。2.2溶液制备对照品溶液取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每毫升含80μg的溶液。供试品溶液取本品粉末3.5g，精密称定，置塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，计算机网络设计摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。阴性对照液按处方及工艺制备不含苦杏仁的阴性样品，同供试品溶液的制备方法学考察阴性对照品溶液。2.3方法学考察阴性干扰实验取“2.2”项下3种溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪测定。结果色谱图中在苦杏仁苷峰相应的保留时间附近未检出干扰峰（图1）。

线性关系考察分别精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20、25μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程为Y=117632X-347713，r=0.9995。结果表明，苦杏仁苷对照品进样量在0.0824～2.0600μg范围内与峰面积有良好的线性关系。精密度试验精密吸取对照品溶液10μl，重复进样6次，记录色谱图，按峰面积计算，结果RSD=0.18%，说明仪器精密度良好。重现性试验取同一批号样品6份，分别依法处理后测定。结果RSD=0.64%，表明该方法重复性良好。稳定性试验取同一批号样品溶液，在室温条件下放置，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24h进样，测得峰面积值RSD=0.78%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。加样回收率试验精密称取已知含量的供试品（批号：130203，苦杏仁苷含量为3.28mg/g）6份，每份0.5g，精密加入苦杏仁苷对照品溶液（0.1950mg/ml）2ml，按供试品溶液方法制备，依法测定含量并计算回收率（表1）。
2.4样品含量的测定取3批样品，按供试品溶液方法制备，分别进样10μl，依法测定，采用外标法计算样品中苦杏仁苷的含量（表2）。
3讨论本实验中，苦杏仁苷在207nm处有最大吸收，选用207nm作检测波长，苦杏仁苷峰有最大峰面积，其他组分在此无干扰吸收。苦杏仁苷的含量测定方法现多用HPLC法。在实验过程中，曾按照参考文献，用各种比例的甲醇-水、乙腈-水作流动相，发现系统的稳定性太差，无法检测，且出现双齿峰，改用乙腈-水后，得到单峰，稳定性明显改善，且灵敏度也有所提高，苦杏仁苷色谱峰基本上达到了基线