安徽省地方标准饲料中盐酸克伦特罗的测定——胶体金免疫层析法.pdf

ICS

备案号：DB34
安徽省地方标准

DB34/T818—2008

饲料中盐酸克伦特罗的测定
——胶体金免疫层析法

2008-08-01发布2008-08-01实施

安徽省质量技术监督局发布
DB34/T818—2008

前言

本标准由安徽省畜牧兽医局提出。
本标准由安徽省质量技术监督局批准。
本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。
本标准起草人：许世富、蔡东东、汤春莲、明文庆。
本标准于2008年8月1日首次发布。

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DB34/T818—2008

饲料中盐酸克伦特罗的测定
——胶体金免疫层析法

1范围

本标准规定了用胶体金免疫层析法检测饲料中的盐酸克伦特罗。
本标准适用于饲料中盐酸克伦特罗的快速检测。
本标准检测限为10µg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的
修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

本试验为竞争抑制法。将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。硝酸纤维素膜为
载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移。在移动的过程中，会发
生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶
体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗－BSA
偶联物的结合，使检测线不显颜色，结果为阳牲；反之，检测线显红色，结果为阴性。

4试剂和材料

除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。
4.1胶体金免疫层析快速检测装置组成
4.1.1盐酸克伦特罗全抗原的偶联率为1：10～1：20（BSA：CL）。
4.1.2抗盐酸克伦特罗抗体、多抗或单杭。多抗可以由兔或羊血清获得，效价应大于5000（间接ELISA
法），或有效抗体含量应大于0.05mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。单抗由鼠腹水获
得，效价应大于15000（间接ELISA法），或有效扰体含量应大于0.5mg/mL；特异性应大于5000（间接
抑制ELISA法）。抗体相对亲和力为3.56×109（结合率下降50％时，相对应的抗体浓度的例数）。
4.1.3样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。
4.1.4金释放垫：玻璃纤维片，免疫金释放时间小于5min，释放效率大于80％。
4.1.5NC膜：孔径为0.45μm，4cm毛细管时间不小于140s。
4.1.6吸水纸。
4.1.7底板。
4.1.8塑料盒。
4.2塑料吸管。
4.3离心机。
4.4提取液。
4.5阴性对照
取空白样品依法制备。

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4.6阳性对照
取盐酸克伦特罗标准溶液用甲醇稀释为10µg/L。

5实验步骤

5.1样品制备
取饲料约0.5g，装入1.5mL离心管，加提取液1mL，浸泡5min～10min，搅动2次，4000rpm离心5min～
10min，取上清液。
5.2溶液制备
5.2.1盐酸克伦特罗储备液
准确称取盐酸克伦特罗对照品适量，用甲醇溶解后稀释成1mg/mL的储备液，－18℃冰箱中贮存备
用。
5.2.2www.17jzw.com盐酸克伦特罗标准溶液
取盐酸克伦特罗系列储备液，用前用甲醇稀释。
5.3样品检测
5.3.1从包装袋中取出盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测装置，置于平整的台面上待测。检测装
置应即开即用。

5.3.2用塑料吸管（4.2）垂直滴加3滴无气泡上清液（约60μL～80μL）于加样孔内，每批需做阴
性对照和阳性对照各一孔，加样方法同样本。
5.3.3www.17bzw.cn加样后5min～10min内观察结果。
6结果判断

6.1方法确认
阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说明检测装置有效，可进行检测；如阴性对照
不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带，出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测装置失效，
不能进行检测。
6.2测定结果
待检样品出现红色条带为阴性（不含盐酸克伦特罗或盐酸克伦特罗的含量＜10www.17jzw.netμg/kg）；待检样品
不出现红色条带为阳性（盐酸克伦特罗的含量≥10μg/kg）。

7结果确认

阳性样品应用气相色谱－质谱法（GC/MS）方法进行确认。

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