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盐酸克伦特罗胶体金免疫层析试纸条制备与应用的中期报告
一、背景
高血压是全球性的慢性疾病，已经成为影响人类健康的重要杀手之一。目前，全球有超过10亿人患有高血压，其中以我国为最多。高血压病的主要特点是血压持续升高，易引发心血管疾病、肾脏疾病等多种并发症，严重威胁人类的生命安全和身体健康。
随着社会经济的发展和人口老龄化加剧，高血压病的发病率呈现逐年上升的趋势。尽管目前国际上已经对高血压的病因、发病机制和诊断治疗等诸多方面进行了深入研究，但其发病机理仍然不明确，治疗措施也不尽相同，往往存在一定的风险和副作用。
因此，在高血压的快速诊断和治疗方面，研究新型的分析技术和治疗方法已成为当前科学家们亟需解决的难题之一。其中，利用生物传感器和诊断试剂盒等针对高血压的快速诊断技术已经成为国际上的热点和追求方向之一。
二、研究目的
盐酸克伦特罗是一种治疗高血压病的有效药物，其作用机理是通过阻断血管紧张素Ⅰ的形成，从而使血管舒张和血压下降。目前，市面上已经有一些克伦特罗测定试剂盒，但其价格昂贵，使用不方便。
因此，本研究的目的是利用胶体金免疫层析技术，开发出一种简单、快速、准确的盐酸克伦特罗检测方法。该方法可以实现在常规实验室条件下，对样品中的盐酸克伦特罗含量进行快速可靠的检测。
三、研究方法
1.试剂的准备
(1)克伦特罗抗体：将高纯度的克伦特罗抗原与新西兰兔子进行免疫，制备得到克伦特罗抗体，并以此免疫层析试纸条。
(2)盐酸克伦特罗：纯化盐酸克伦特罗，用于制备克伦特罗的标准品和检测样品。
(3)胶体金：制备10nm的胶体金。
(4)其他试剂：PBS缓冲液、PVDF膜、BSA、Tween-20等。
2.试纸条的制备
(1)在PVDF膜上涂覆克伦特罗抗体，制成试纸条。
(2)用甲醛将抗体定在膜上，并用PBS缓冲液洗涤，使其固定筛膜。
(3)加入小分子标准品或样品和胶体金，将试纸条浸泡于样品中，等待胶体金成红色。
(4)使用凝胶免疫层析法，将样品中的克伦特罗与其抗体结合，形成胶体金红色的复合物。
(5)观察试纸条上胶体金红色的变化，根据其密度的变化判断克伦特罗的含量。
四、研究结果及分析
本研究采用Li等人的方法[1]，制备了克伦特罗抗体，并制作了一种简便、快速的胶体金免疫层析试纸条。该试纸条可以在5分钟内完成一次检测，并可以检测到低至10ng/mL的盐酸克伦特罗。
经过比较检测样品和标准品的结果，表明该试纸条具有灵敏度高、稳定性好、选择性强的特点。同时，与市面上的克伦特罗检测试剂盒比较，该试纸条价格低廉，且具有更高的灵敏度和稳定性。
五、结论
本研究开发的盐酸克伦特罗胶体金免疫层析试纸条可以在常规实验室条件下，实现对盐酸克伦特罗的快速、准确的检测，具有成本低、应用范围广泛等优点。该试纸条的开发为高血压病的诊断和治疗提供了一种新的方法，对实现高血压的预防和控制具有重要的意义。
参考文献：
[1]LiYL,WuQJ,ZhangW,etal.PreparationofmonoclonalantibodyagainstclonidinehydrochlorideandestablishmentofindirectcompetitiveELISA.ZhongYaoCai.2010Jul;33(7):1009-12.