鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用.pdf

中国农业科学2009,42(5):1813-1819
ScientiaAgriculturaSinicadoi:10.3864/j.issn.0578-1752.2009.05.039
鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用

孙法良，刁有祥，孙宁，马艳芳，纪巍

（山东农业大学动物科技学院，山东泰安271018）

摘要：【目的】制备抗氟苯尼考（FFC）的高亲和力特异性抗体，建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方
法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HSA）经混合酸酐法偶联，得到免疫抗原和包
被抗原，其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。
建立并优化了间接竞争ELISA检测方法。【结果】抗血清效价为1﹕102400。最佳包被抗原浓度为0.5µg·ml-1，
最佳抗体工作浓度为1﹕6400，酶标二抗的工作浓度为1﹕20000。回归方程Y=-0.1516X+0.788（R2=0.9859），
检测范围为0.18～500ng·ml-1，检出限为0.18ng·ml-1，批内和批间平均变异系数分别为4.86%和7.77%。交叉反
应试验中，抗血清与FFC结构相似的氯霉素和甲砜霉素交叉反应率分别为0.094%和0.098%，与其它药物交叉反应
率均小于0.01%，表明该方法具有很强的特异性。FFC以浓度0.18～500ng·g-1在鸡肉中添加，回收率为84.14%～
106.1%，变异系数为2.1%～5.6%。【结论】成功获得了高效价、高特异性的抗FFC抗体，建立了鸡肉中氟苯尼考
残留检测的ELISA方法。结果表明，所建立的检测方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点。
关键词：氟苯尼考；残留检测；间接竞争ELISA

EstablishmentandApplicationofDetectingtheResiduesof
FlorfenicolinChickenMusclebyIndirectCompetitive
Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay

SUNFa-liang,DIAOYou-xiang,SUNNing,MAYan-fang,JIWei

(CollegeofAnimalScienceandTechnology,ShandongAgriculturalUniversity,Taian271018,Shandong)

Abstract:【Objective】Thepurposeofthestudyistoobtainspecialantibodyanddevelopcompetitiveindirectenzyme-linked
immunosorbentassay(ciELISA)forflorfenicol【Method】Florfenicolhaptenwasconjugatedwiththecarrierproteinsbovineserum
albumin(BSA)asimmunogenandwithhumanserumalbumin(HSA)ascoatingantigen,respectively,andthecouplingratioof
FFC-HS-BSAwas14.4andthecouplingratioofFFC-HS-HSAwas14.7.Polyclonalantibodyagainstflorfenicolwasgeneratedby
immunizingrabbitswithFFC-HS-BSA.【Result】Theantiserumwithhightiterwas1﹕102400.TheindirectcompetitiveELISA
revealedthattheoptimalconcentrationofrabbitserumwas1﹕6400,theoptimalconcentrationofcoatedantigenwas0.5µg·ml-1,
andtheoptimalconcentrationofsheepanti-rabbitIgGwas1﹕20000.TheregressionequationwasY=－0.1516X+0.788
(R2=0.9859),thelowestdetectionlimitwas0.18ng·ml-1,thelinearrangewasfrom0.18ng·ml-1to500ng·ml-1,andthecoefficientsof
variationofintra-assayandinter-assaywererespectively4.86%and7.77%.Theantiserumhadcrossreacti