一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113009043A(43)申请公布日2021.06.22(21)申请号202110283219.7(22)申请日2021.03.17(66)本国优先权数据202011312569.32020.11.20CN(71)申请人淄博市疾病预防控制中心地址255000山东省淄博市张店区东一路44号(72)发明人邢燕王勤王钟高慧李婷婷于俊丽王敏(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/14(2006.01)G01N30/72(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图2页(54)发明名称一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法(57)摘要本发明公开了一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法，包括如下步骤：S1、标准溶液配制；S2、样品前处理；S3、实验结果与分析；方法样品经过氨化乙腈提取，采用QuEChERs法进行样品净化，液相色谱‑三重四极杆串联质谱同时测定蜂蜜中的氟苯尼考和氟苯尼考胺含量，内标法定量。结果氟苯尼考和氟苯尼考胺在实验浓度范围内线性关系良好，检出限在0.05μg/kg～0.2μg/kg之间，加标回收率在96.5％～105％范围内，相对标准偏差(RSD)为3.8％～5.3％。结论该方法检测操作简便快捷，能够对蜂蜜中痕量的氟苯尼考和氟苯尼考胺进行准确的定性和定量分析。CN113009043ACN113009043A权利要求书1/2页1.一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、标准溶液配制；S1.1、标准储备液：分别准确称取氟苯尼考、氟苯尼考胺和氯霉素‑d5标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，标准储备溶液质量浓度均为1.0mg/mL，‑20℃以下避光贮存，备用；S1.2、标准中间液：分别准确量取100μL氟苯尼考和氟苯尼考胺标准储备液，用甲醇定容至10mL，标准中间液质量浓度为10μg/mL，内标标准中间液：准确量取100μL氯霉素‑d5标准储备液，用甲醇定容至10mL，标准中间液质量浓度为10μg/mL；S1.3、标准使用液：准确吸取标准中间液100μL，用10％乙腈‑水溶液定容至10mL，标准使用液质量浓度为100ng/mL；内标标准使用液：准确吸取氯霉素‑d5内标标准中间液100μLmL和20μL氟苯尼考胺‑d3标准溶液，用10％乙腈‑水溶液定容至10mL，标准使用液质量浓度为100ng/mL；S1.4、标准系列：取6个1mL的容量瓶，分别加入2、10、20、50、100、200、500μL的标准使用液，再加入50μL内标标准使用液，空白基质定容至1mL，得到浓度分别为0.2、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的标准系列溶液；S2、样品前处理；S2.1、样品经过氨化乙腈提取，采用QuEChERs法进行样品净化，液相色谱‑三重四极杆串联质谱同时测定蜂蜜中的氟苯尼考和氟苯尼考胺含量，内标法定量；S2.2、样品处理：于50mL的离心管中称取2g左右蜂蜜样品；加入1mLH2O涡旋混匀，加入氯霉素‑d5、氟苯尼考胺‑d3应用液50μL，再加入1％氨化乙腈10mL，超声提取5min，于8000rpm下离心2min，上清液待净化；S2.3、样品净化：于15ml离心管中预先加入250mgC18固相萃取材料，加入2g无水Mg2SO4，加入7ml左右上清液，涡旋1min，于8000rpm下离心2min，取5ml上清液至另一离心管中，在40℃温度下用氮气吹干，用0.5ml10％的乙腈‑水溶液复溶，过0.22μm滤膜后，用于LC‑MS/MS分析；S3、实验结果与分析；S3.1、质谱条件优化，采用500ng/ml的氟苯尼考、氯霉素‑d5、氟苯尼考胺和氟苯尼考胺‑d3的混合标准溶液分别在负离子和正离子的模式下进行一级质谱全扫描，确定母离子分别为336.0、326.0、247.8和251.0，分别对上述母离子进行二级质谱全扫描，通过优化确定氟苯尼考、氯霉素‑d5、氟苯尼考胺和氟苯尼考胺‑d3的子离子及碰撞能和射频电压等参数；S3.2、分离条件优化，在串联质谱上进行正负离子采集模式切换时，采用0.01％氨水水溶液+乙腈组成的二元流动相体系，在此条件下，目标物在质谱上的响应值较高，两个组分的峰形和分离度较好。2.根据权利要求1所述的一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法，其特征在于：氟苯尼考、氟苯尼考胺及氯霉素‑d5的纯度>99.0％。3.根据权利要求1所述的一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法，其特征在于：氟苯尼考胺‑d3标准溶液，定值浓度5mg/L。4.根据权利要求1所述的一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速