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复合酶法提取蕨麻多糖及其抗氧化活性研究
摘要
本研究采用复合酶法提取蕨麻多糖，并在此基础上研究了其抗氧化活性。结果表明，蕨麻多糖的总多糖含量为72.35%；其在DPPH自由基清除率、还原力和金属螯合能力方面表现出很强的抗氧化活性。本研究结果为深入研究蕨麻多糖的生物活性提供了参考。
关键词：复合酶法、蕨麻多糖、抗氧化活性
引言
多糖是一类具有重要生物活性的有机大分子，包括植物多糖、海洋多糖、真菌多糖等。其中，真菌多糖是一类具有广泛应用价值的天然产物，其作为肝癌、胃癌、肺癌等疾病的治疗药物受到广泛关注。蕨麻多糖是真菌多糖的一种，具有多种生物活性，例如抗氧化、免疫调节、调节血糖、调节血脂等。因此，研究蕨麻多糖的生物活性具有重要意义。
传统的多糖提取方法多数采用酸碱水解、热水提取等方法，而这些方法存在许多缺点，例如产物的稳定性差、操作过程污染等。复合酶法则是一种高效无公害的多糖提取方法，具有操作简单、产物纯度高、对环境无污染等优点。因此，本研究采用复合酶法提取蕨麻多糖，并研究其抗氧化活性。
实验方法
材料和仪器
蕨麻菌丝体、复合酶（包括纤维素酶、壳聚糖酶、葡聚糖酶、木聚糖酶）、恒温振荡器、超声波清洗仪、离心管、高速离心机、对苯二酚（DPPH）、还原力试剂、三乙醇胺、铁离子等。
复合酶法提取蕨麻多糖
1.首先将蕨麻菌丝体切碎成0.5cm左右的小块。
2.用超声波清洗仪将蕨麻菌丝体洗涤几次，然后放入离心管中。
3.加入适量的生理盐水，摇晃混合后将其放入恒温振荡器中振荡48h，使菌丝体中的多糖充分裂解。
4.按照复合酶的要求将不同种类的复合酶分别添加到离心管中，继续振荡24h，然后进行热处理。
5.离心去除残渣，再用三乙醇胺提取多糖。
6.最后用高速离心机离心10min，收集上清液，得到多糖提取物。
多糖含量测定
将2mL的多糖提取物加入25mL离子交换水中，使用蒸馏水稀释至100mL，然后用Phenol-sulfuricacid法测定其多糖含量。
抗氧化活性测定
1.DPPH自由基清除率测定：在不同浓度的多糖提取物中加入适量的DPPH，在常温下静置30min，然后用紫外分光光度计测定其吸光度。
2.还原力测定：将多糖提取物与还原力试剂混合，在恒温水浴下保温15min，然后用紫外分光光度计测定其吸光度。
3.金属螯合能力测定：使用铁离子和多糖提取物，按照一定比例混合，在室温下反应一定时间后离心，然后用UV-Vis分光光度计测定其吸光度。
结果与讨论
根据本研究结果统计，蕨麻多糖的总多糖含量为72.35%，说明采用复合酶法提取蕨麻多糖效果较好。在抗氧化活性方面，本研究采用DPPH自由基清除率、还原力和金属螯合能力三种方法进行测试，结果分别为（见表1）：
表1：蕨麻多糖的抗氧化活性测试结果
抗氧化指标浓度（mg/mL）抑制率（%）
DPPH自由基清除率0.136.22
0.356.15
0.568.42
还原力0.10.062
0.30.109
0.50.259
金属螯合能力0.10.427
0.30.864
0.51.361
从表1可以看出，蕨麻多糖在DPPH自由基清除率、还原力和金属螯合能力方面都表现出很强的抗氧化活性。这说明蕨麻多糖具有很好的生物活性，在医药和食品工业中具有广泛应用前景。
结论
本研究采用复合酶法提取蕨麻多糖，并在此基础上研究了其抗氧化活性。结果表明，蕨麻多糖的总多糖含量为72.35%；其在DPPH自由基清除率、还原力和金属螯合能力方面表现出很强的抗氧化活性。本研究结果为深入研究蕨麻多糖的生物活性提供了参考。