一种A型轮状病毒的荧光定量PCR检测方法.pdf
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一种A型轮状病毒的荧光定量PCR检测方法.pdf
本发明公开了一种A型轮状病毒的荧光定量PCR检测方法,以克隆轮状病毒VP6基因并体外转录形成RNA为标准品,在此基础上建立的TaqMan探针荧光定量PCR的检测方法;属于分子生物学领域;该方法包括以轮状病毒VP6基因为靶基因,设计引物和探针,设计实验找到最优条件下的退火温度、引物浓度、探针浓度;在引物外围再设计一对引物,并扩增片段,用该片段构建重组质粒,以构建好的重组质粒体外线性化后作为模板,转录获得RNA,十倍梯度稀释后做为标准品,进行实时PCR反应,建立了Ct/LogCopynumber工作曲线,并验
一种荧光定量PCR反应液及荧光定量PCR方法.pdf
本发明属于分子生物学技术和实验方法领域,具体涉及一种荧光定量PCR反应液,其特征在于包含PCR反应增强剂,所述PCR反应增强剂选自二甲亚砜、甘油、牛血清白蛋白、甲酰胺、聚乙二醇6000、亚精胺、硫酸铵和甜菜碱中的一种或多种,例如二甲亚砜、牛血清白蛋白和甜菜碱。本发明的荧光定量PCR反应液还包含具有5′-3′聚合酶活性和5′-3′外切酶活性的耐热DNA聚合酶,优选为同时具有3′-5′外切酶活性的耐热DNA聚合酶和热启动耐热DNA聚合酶。本发明还涉及包含所述反应液的试剂盒以及利用所述反应液进行荧光定量PCR的
一种用于检测鸽轮状病毒A型的实时荧光定量PCR检测引物及其试剂盒.pdf
本发明提供一种用于检测鸽轮状病毒A型的实时荧光定量PCR检测引物及其试剂盒,引物序列如SEQIDNO.1‑2所示,具有很高的特异性和灵敏度。建立的方法能够对鸽群中鸽轮状病毒A型感染进行检测,简化操作程序、节约成本。实时荧光定量PCR反应结束后,通过观察其扩增曲线结合Tm值即可直接对结果进行判断。本发明的建立可填补国内外相关领域空白。
一种鸽轮状病毒A型荧光定量PCR检测的引物和探针及其试剂盒.pdf
本发明提供一种鸽轮状病毒A型荧光定量PCR检测的引物和探针及其试剂盒,所述引物序列如下:引物PiRVA‑TF:5’‑CCGAACTGCTCCTGTATGAAT‑3’,引物PiRVA‑TR:5’‑CATTGCCCATTGCTATCCATTT‑3’;所述探针为:探针PiRVA‑probe:5’‑AGTCTGACATCCATTTCATTGCACAACC‑3’,且其5’‑端标记荧光报告基团FAM,在探针的中间和3’‑端分别标记淬灭基团DBQ1,本发明建立的方法灵敏度高、稳定性好、特异性强、重复性好,可用于鸽轮状病
荧光定量PCR检测项目.ppt
荧光定量PCR检测项目实时荧光定量PCR方法------TaqMan法Hydrolysis实时荧光定量PCR定义实时荧光定量PCR原理实时原理实时荧光定量PCR原理定量原理扩增曲线荧光阈值Ct值Ct值的重现性定量原理定量原理标准曲线确定未知样品的C(t)值通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量标本采集和运送定量检测的临床意义HBV基因分型HBV基因型的临床意义乙型肝炎的病程及转归亚洲无症状HBV携带中,与B基因型比较,C基因型在肝硬化及50岁以上的肝细胞癌患者中比例较高,而B基因型与50岁以下,