第二章微生物的纯培养和显微技术详解演示文稿.ppt

第二章微生物的纯培养和显微技术详解演示文稿优选第二章微生物的纯培养和显微技术第一节微生物的分离和纯培养
第二节显微镜和显微技术
第三节显微镜下的微生物第一节微生物的分离和纯培养第五页，共六十一页。第六页，共六十一页。固体培养基是用琼脂或其他凝胶物质固化的培养基。
细菌的固体培养特征：
菌落（colony）：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。每个菌落一般是由单个微生物活体细胞生长、繁殖形成的纯培养物。菌落特征：有光滑型、粗糙型和粘液型三种。
如湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易挑起、质地均匀、菌落正反面及边缘与中央部分的颜色一致。
生物学意义：不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落（或菌苔）一般都具有稳定的特征，是微生物分类鉴定的指征之一。

菌苔（lawn）：当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔（lawn）。菌落第十页，共六十一页。目前实验室常用固体培养基获得微生物纯培养物的几种方法：

1、涂布平板法（spreadplatemethod)
2、稀释倒平板法(pourplatemethod，50℃左右)
3、平板划线法(streakplatemethod)（如四区划线）
4、稀释摇管法(shaketubemethod)涂布平板法与稀释倒平板法平板划线法稀释摇管法（分离厌氧菌）三、用液体培养基获得纯培养---稀释法
适用于一些个体大的细菌、许多原生动物和藻类等。通过高度稀释，使一支试管中分配不到一个微生物。同一个稀释度应有较多的平行试管。
四、单细胞（孢子）分离---显微分离法
对操作技术要求较高，在显微镜下用毛细管或显微针、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养。1、选择平板培养
根据待分离微生物的特点选择不同的培养条件（对于从自然界中分离、寻找有用的微生物十分重要，如从土壤中筛选蛋白酶产生菌，分离高温菌，分离某种抗菌素抗性菌株）
2、富集培养
加富性选择培养基（投其所好）--对羟基苯甲酸
抑制性选择培养基（取其所抗）--致病性肠道杆菌第十七页，共六十一页。六、微生物的保藏技术
菌种保藏就是根据菌种特性及保藏目的的不同，给微生物菌株以特定的条件，使其存活而得以延续。
保藏的方法：
传代培养保藏4℃
冷冻保藏-196℃，-70℃，-30～-20℃
干燥保藏法沙土管，安瓿管（冷冻真
空干燥保藏，最普遍最重要）第二节显微镜和显微技术现代显微技术不仅仅是观察物体的形态、结构，而且发展到对物体的组成成分的定性和定量，特别是与计算机技术结合出现的图像分析、模拟仿真等技术，为探索微生物的奥秘提供了强大武器。一、显微镜的种类及原理

1、普通光学显微镜第二十二页，共六十一页。2、暗视野显微镜3、相差显微镜
4、荧光显微镜（激光共聚焦显微镜）5、透射电子显微镜6、扫描电子显微镜7、扫描隧道显微镜二、显微观察样品的制备
1、光学显微镜的制样
（1）活体观察：压滴法
悬滴法
菌丝埋片法（玻璃纸，涂布
放线菌或霉菌孢子悬液，培养，镜下）（2）染色观察

第二十九页，共六十一页。革兰染色法（GramStain)2、电子显微镜的制样
（1）透射电镜的样品制备
1）负染技术
2）投影技术
3)超薄切片技术：取材→固定→脱水→浸透与包埋→切片→捞片→染色→观察第三十二页，共六十一页。（2）扫描电镜的样品制备
利用电子束作光栅状扫描以取样品的形貌信息。
主要要求样品干燥，且表面能够导电。
干燥方法：自然干燥
真空干燥
冷冻干燥
临界点干燥等第三节显微镜下的微生物定义：以二分裂为主要繁殖方式的单细胞原核微生物。
1、细菌的形态和排列
三种基本形态：
球状：一个分裂面、两个分裂面、
三个分裂面、无定向分裂面
杆状：单杆、链杆、栅状、八字
螺旋状：弧菌、螺旋菌第三十六页，共六十一页。单球菌双球菌四联球菌链球菌八叠球菌葡萄球菌杆菌短杆状螺旋菌第四十六页，共六十一页。其他形态：
柄细菌
球衣菌
支原体
星型细菌
细菌的菌落特征：
表面湿润，小而突起或大而平坦、易挑起柄细菌第四十九页，共六十一页。第五十页，共六十一页。第五十一页，共六十一页。细菌的形态受温度、pH、培养基成分和培养时间等因素影响很大。一般是细菌在适宜的生长条件下培养8~18h时形态比较典型，在不利环境或菌龄老时常出现梨形、气球状和丝状等不规则的多形性（polymorphism），称为衰退型（involutionform）。因此，观察细菌的大小和形态，应选择其适宜生长条件下的对数期为宜。2、古生菌第五十四页，共六十一页。3、原核生物的细胞大小第五十六页，共六十一页。最小和最大的细菌图中箭头所指的是直径在0.5mm的一个Thiomargaritanamibiensis菌体，其体积几乎与果蝇头部的大小相当