细胞培养技术ppt课件.ppt

细胞与免疫学研究技术
及原理第二章细胞培养技术第一节细胞培养的基本知识体外培养细胞培养的缺点培养方法培养条件细胞培养的应用培养细胞可用于多种研究第二节细胞培养的基本条件一、无菌室的设计要求及布局
二、细胞培养的常用设备
三、细胞培养所需的器具、器皿
四、培养用品的清洗、包装及消毒
五、培养用液和培养基的种类和准备一.实验室的设计要求及布局实验室的布局无菌室

门：用拉门减少扬尘，迷宫式分布。
窗：最好无窗，避免直射，减少温差变化。
墙：光滑、不反光、不刺激。
地：用瓷砖或水磨石铺，既光洁又防滑。
灯：日光灯、紫外灯、酒精灯。
台：超净工作台、实验台。超净工作台超净工作台二.细胞培养的常见设备培养设备消毒设备冰箱液氮罐消化设备恒温磁力搅拌器水质纯化装置双蒸水制备仪纯水制备仪显微镜培养瓶中的神经细胞倒置相差显微镜相板和环状光阑Brightfield三.器具器皿的清洗、包装及消毒清洗与包装玻璃器皿的清洗洗液的配方橡胶制品的清洗塑料制品的清洗金属制品的清洗灭菌高压蒸气灭菌干热灭菌滤过灭菌紫外线消毒
无菌室、超净台、塑料培养器皿

化学消毒
酒精、碘酒、环氧乙烷、新洁尔灭等。培养用品清洗和灭菌程序四.培养用液和培养基的种类和准备培养用液培养基植物细胞培养的合成培养基植物细胞培养的合成培养基植物细胞培养的合成培养基动物细胞培养的合成培养基合成培养基的成分氨基酸：包含几乎所有的氨基酸。几乎所有细胞对谷氨酰胺有较高要求，是细胞赖以合成核酸和蛋白质的物质。缺少谷氨酰胺细胞会因生长不良而死亡。
维生素：维持细胞生长的生物活性物质，对细胞代谢有重大影响。可分为水溶性和脂溶性两大类。
无机离子：除Na、K、Ca、P等大量元素外，还需一些微量元素，如Cu2﹢、Zn2﹢、Fe2﹢等。
碳水化合物：主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠、醋酸钠等。其它成分合成培养基的种类1959年——Eagle在原设计包括细胞生长必需的13种氨基酸和8种维生素基础培养基的基础上进一步修改，提出Eagle氏最低必需培养基（Eagle’sminimunessentialmedium，MEM）
以后由Dulbecco又改良成（DulbeccoMEM，DMEM）培养基。去除了一些必须氨基酸,添加了一些非必须氨基酸，分为低糖和高糖型。1978年——Iscove等在Dulbecco的DMEM培养液的基础上改良成为Iscove氏的DMEM培养基。
血清无血清培养基另外，血清中还有一些有害物和抑制物，对细胞有去分化的作用，影响细胞的功能表达。因此，许多研究工作就要求培养基中不含血清和其他天然成分。
所以，就在培养基中添加特定种类和含量的生长因子，如EGF、bFGF、IGF-1、PDGF、NGF、TGF-α、TGF-β和胰岛素等，进行无血清培养。第三节植物细胞培养技术植物细胞培养植物细胞培养一.单倍体细胞培养单倍体细胞培养1.花药培养花药培养过程花药培养过程2.花粉培养花粉培养过程花粉培养过程花粉培养过程花粉培养过程3.单倍体培养的应用3.单倍体培养的应用二.原生质体培养原生质体的分离和纯化原生质体的分离和纯化原生质体培养与植株再生原生质体培养的应用原生质体培养的应用Thanks