细胞培养技术ppt课件.ppt

细胞培养技术一、细胞培养概念细胞培养特点细胞培养目的和作用细胞培养目的和作用二、培养细胞相关条件二、培养细胞相关条件生物安全柜生物安全柜三级生物安全柜3.相关仪器设备
（1）CO2培养箱
（2）倒置显微镜、普通显微镜及照相系统
（3）冰箱（4度，-20度，-80度）
（4）超纯水系统（电阻率≥18.2MΩ.cm）
（5）细胞存储器（液氮罐，深低温冰箱、-80度冰箱）
（6）高温高压灭菌装置、清洗装置
（7）滤菌相关仪器（针式滤器，泵加压过滤）
（8）离心机、天平、pH仪、移液枪等
（二）培养用品
（1）培养瓶（25、75cm3）
培养板（96、48、24、12、6孔）
培养皿（各种直径规格）

（二）培养用品
（2）离心管（15、50ml）
（3）移液管、吸管
（4）冻存管、EP管
（5）试剂瓶等。
（三）细胞培养用试剂
（1）培养基
MEM，DMEM，RPMI1640
4℃保存，避免光照；用前放在37℃温热。

（三）细胞培养用试剂
（1）培养基

水
无机盐
氨基酸
维生素
其他成分——葡萄糖、酚红、HEPES、丙酮酸钠
.（三）细胞培养用试剂
（1）培养基

培养基选择：按提供细胞来源的要求准备。

什么情况下选择无酚红培养基：
酚红影响到实验结果
流式细胞仪检测细胞样品（三）细胞培养用试剂
（2）血清

.血清分类
1、特级胎牛血清（最高级别的）（1）Hyclone北美特级胎牛血清（SH30070.03）（2）Gibco北美特级胎牛血清（16000-044）

2、优等级胎牛血清（1）Hyclone加拿大优等胎牛血清（SH30396）
（2）Hyclone澳大利亚优等胎牛血清（SH30084）（3）Gibco澳大利亚胎牛血清（10099-141）
血清分类
3、普通进口胎牛血清
如Hyclone南美胎牛血清（SV30087）
4、国产的各种系列胎牛血清国产的胎牛血清，国内没有严格意义的胎牛血清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而国内都是剖腹产出胎牛，8小时左右取血，然后，进行过滤分装。
5、其他血清新生牛血清，小牛血清，一般国产的。（三）细胞培养用试剂
（2）血清
使用：5～20%。
保存：–20～-70℃储存；
4℃存放勿超过一个月。
解冻步骤：
-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装或使用。

（三）细胞培养用试剂
血清解冻后发现有絮状物出现，该如何处理?
原因：脂蛋白的变性；
血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解冻后，也会存在于血清中，也是造成絮状物的主要原因之一。这些絮状物的产生不会影响血清本身的质量。
去除方法：可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，将上清液加入培养基内一起过滤。我们不建议您直接过滤血清以去除这些絮状物，因为它可能会阻塞过滤膜。（三）细胞培养用试剂
血清热灭活：
56℃,30分钟加热已完全解冻之血清。加热过程中须规则摇晃均匀。目的：使血清中补体成份失活。
启动的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
除非必须，一般不建议作此热处理。
（二）细胞培养用试剂
（3）缓冲液
Hanks、PBS
4℃保存，避免光照；用前放在37℃温热。
（4）抗生素
工作浓度储存温度杀灭细菌penicillin100units/ml-20℃G(+)bacteriastreptomycin100ug/ml-20℃G(+)andG(-)bacteriachlotetracycline50ug/ml-20℃G(+)andG(-)bacteriagentamicin50ug/ml-20℃G(+)andG(-)bacteria,
mycoplasma
amphotericinB2.5ug/ml-20℃yeastandmoldsnystatin50ug/ml-20℃yeastandmoldsfungizone2.5ug/ml-20℃yeastandmolds

（5）添加因子
生长因子（EGF、FGF、BFGF）、胰岛素、肝素、二巯基乙醇等
（6）消化液
胰酶（0.25%、0.125%）、EDTA（0.02%）
消化效果与浓度、温度、时间、pH值等相关
（三）细胞培养用试剂
（7）其他
谷氨酰胺：终浓度2mmol/L
HEPES：10-25mmol/L
丙酮酸钠：终浓度1mmol/L
2-巯基乙醇：终浓度50uM

1.细胞培养介绍.flv
（一）基本操作
1.无菌操作
防止微生物污染；
培养用一切物品、液体都无菌。
（37度预热，或室温平衡）
2.操作区消毒
75%酒精擦拭（生物安全柜，进入操作区物品）
紫外消毒20-30min
3.洗手和着装
4.实验操作
动作稳、准