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茶多糖的提取分离茶多糖提取分离的研究意义及现状 茶多糖的提取工艺流程和方法 茶多糖的分离及纯化 茶多糖提取分离所用仪器设备 多糖广泛存在于动物细胞膜、植物和微生物细胞壁中,是构成生命的四大基本物质之一。糖类尤其多糖是近年来研究比较热的一类重要的生物高分子化合物和重要的信息分子,它分布广泛!功能多种多样,茶多糖也不例外,其主要功能据报道有降血糖、降血脂、降血压、抗血栓等作用,具有相当广阔的应用前景,茶多糖的研究首要是提取分离纯化。多糖因其具有多种生物活性而越来越受到人们的关注,特别是近十余年来,随着世界各国科学家对植物多糖分离纯化、结构分析、理化特性、免疫学及药理学等方面研究的不断深入,寻找一种资源相对丰富,成本低廉的植物多糖源已成为食品界、医药界关注的焦点。中国对多糖的研究始于20世纪70年代,且发展很快。由于多糖多种多样的生物活性功能以及在功能食品和临床上广泛使用,使多糖生物资源的开发利用和研究日益活跃,成为天然药物、生物化学、生命科学的研究热点。茶多糖是茶叶复合多糖的简称,由糖类、果胶、蛋白质等组成,其中多糖部分包括阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、半乳葡聚等水溶性多糖。具有降血糖、降血脂、增强免疫力、降血压、减慢心率、增加冠脉流量、抗凝血、抗血栓和耐缺氧等作用,近年来发现茶多糖还具有治疗糖尿病的功效。清水岑夫(1987)研究发现,服用茶多糖链脲佐菌素诱发的高血糖小鼠血糖明显下降,最高下降率达40%;对正常小鼠腹腔注射茶多糖500mg/kg,给药7h后出现降血糖效果。王小刚等(1991)报道,分别给正常小鼠灌胃50mg/kg和100mg/kg的茶多糖,小鼠血糖浓度分别下降了14%和17%;而分别给正常小鼠腹腔注射25mg/kg和100mg/kg的茶多糖,其血糖浓度分别下降48%和52%,因此,不同给药方式降血糖的效果不同。Isigukik.等(1992)发现腹腔注射茶多糖可使大鼠的血糖下降;将茶多糖用于糖尿病的辅助治疗,所有患者的症状均有好转。TadadazuT.等(1998)对链脲佐菌素诱导发的高血糖模型大鼠用茶多糖灌胃,发现有明显的降血糖用用。据江和源等(2004)报道,茶多糖对正常小鼠及四氧嘧啶必糖尿病小鼠具有降血糖作用,这可能与茶多糖能减弱四氧嘧啶对胰岛β细胞的损伤或改善受损伤的β细胞的功能有关。 已往的研究证明,茶叶原料的老嫩程度对茶多糖含量的影响很大,并表现出随茶叶粗老程度的递增,茶多糖含量增加。日本东京医科大学的研究认为,茶多糖体复合物在85℃以上时,其有效成分的生物活性就会受到破坏,因此建议茶多糖的提取在常温或低温下进行。 分离提取和精制纯化方法对茶多糖的生理活性有很大影响,茶多糖的提取制备通常可采用溶剂提取、凝胶层析、膜分离等手段。◆单一提取工艺流程 1.超滤 原料→温水浸提(2~3次)→水提液超滤→乙醇沉淀→冷冻干燥→TPS提取物 2.醇沉淀 原料粉碎一温水浸提一水提液一浓缩得浓缩液一乙醇沉淀一沉淀物一冷冻干燥TPS提取物 ◆综合提取工艺流程 1.原料→沸水浸提(2次)→离心、除渣→提取液氯仿萃取→ 有机层→回收氯仿、精制、干燥→咖啡碱 有机层→回收、干燥、精制→茶多酚 水层→乙酸乙酯萃取 水层→乙醇醇析→离心、取滤渣、精制、干燥→茶多糖2.原料→乙醇浸提→ 滤渣酸性乙醇提取→滤液丙酮分离→回收、精制干燥→茶多糖 有机层→回收、精制、干燥→咖啡碱 滤液浓缩氯仿萃取有机层→回收、精制、干燥→茶多酚 水层一乙酸乙酯萃取 水层→浓缩、干燥→水溶性复合物 3.CTBA沉淀 原料粉碎→温水浸提→水提液→浓缩得浓缩液→5%CTAB沉淀→20%NaC1溶解→水溶液→乙醇沉淀→沉淀物→冷冻干燥→TPS提取物 4.乙醇提取 原料→乙醇浸泡回流(3次)→取滤渣→沸水提取(3次)→过滤→提取液浓缩、脱脂、脱蛋白、脱色等→乙醇沉淀(2次)→取滤渣精制、干燥→TPS提取物CTAB沉淀法制备的茶多糖粗提物中,蛋白质含量达2.81%,CTAB沉淀多糖的同时,把蛋白质也一起沉淀下来;醇沉淀法提取的茶多糖的多酚含量最高;与CTAB沉淀法和醇沉淀法相比,超滤法所得的粗茶多糖的多糖含量高,多酚、可溶性蛋白质含量均较低。通过 纸层折和气相色谱分析,3种工艺所提取的茶多糖均由阿拉伯糖、木糖、核糖、葡萄糖、半乳糖及半乳糖醛酸组成,组成比差异不大。◆酶法提取 植物的细胞壁主要由纤维素、半纤维素、果胶质、木质素等物质构成致密结构。添加适量的纤维素酶、果胶酶和蛋白酶有利于细胞壁和细胞间质层的分解,提高细胞内物质的溶出率,从而提高多糖的提取率。有学者发现,在茶汤中添加0.3%的纤维素酶可使多糖浸出率提高20%左右。用低温水法提取茶多糖和纤维素酶法提取茶多糖,发现纤维素酶法提取的多糖含量比水法提取的高63.3%,多糖总提取率达2.97%,粗多糖(