异丙肾上腺素对大鼠原代肝细胞缺氧复氧的影响.docx

异丙肾上腺素对大鼠原代肝细胞缺氧复氧的影响
引言
缺氧和复氧是许多疾病的共同特征。肝脏是人体代谢功能中心，缺氧复氧对肝细胞的生存与功能起着至关重要的作用。研究发现，异丙肾上腺素（isoproterenol）在动物模型中可以改善缺氧复氧后肝细胞凋亡，增加肝细胞生长和代谢活性。因此，本论文旨在探讨异丙肾上腺素对大鼠原代肝细胞缺氧复氧的影响，以期为肝脏缺氧后的保护提供一定的实验依据。
材料与方法
1.实验动物
成年雄性SD大鼠12只，体重220-240g。
2.主要试剂
异丙肾上腺素（isoproterenol）引物，阿司匹林（aspirin）引物。
3.组织细胞培养
大鼠肝脏解剖后，将肝脏组织切小块，用离心法分离细胞。在96孔板上取1×10^4个细胞/孔，以DMEM（4.5g/L葡萄糖；10%胎牛血清）为培养基培养24h。
4.缺氧复氧处理
SD大鼠肝脏离体缺氧处理：将98%的N2和2%的CO2混合，用这种气体溶液淹没大鼠肝脏，保持肝脏缺氧处理120分钟。复氧处理：用95%的氧气和5%的二氧化碳混合，将其从大鼠肝脏上通入，保持肝脏复氧处理120分钟。
5.试验组分配
九组实验，每组实验分别为：正常对照组、缺氧组、复氧组、异丙肾上腺素处理组、异丙肾上腺素+缺氧组、异丙肾上腺素+复氧组、阿司匹林处理组、异丙肾上腺素+阿司匹林处理组、异丙肾上腺素+阿司匹林+缺氧组。
6.实验结果分析
分别使用MTT检测肝细胞增殖率，AnnexinV-FITC/PI双荧光流式细胞术分析肝细胞凋亡率，ELISA法检测肝细胞代谢酶丙泊酚羧酸转移酶（CAT）和谷草氨酸乙酰转移酶（ALT）的变化，实验数据按照均值±标准差计算。
结果
经过缺氧-复氧处理后，肝细胞增殖率明显降低，肝细胞凋亡率、CAT和ALT水平升高。而异丙肾上腺素处理后，肝细胞增殖率、CAT和ALT水平显著升高，而肝细胞凋亡率则明显降低。另外，与异丙肾上腺素单独使用相比，加入阿司匹林后，CAT、ALT水平进一步高于异丙肾上腺素单独组。
讨论
缺氧和复氧是许多疾病的共同特征，肝功能异常与缺氧有着密不可分的关系。本研究发现异丙肾上腺素可以显著改善肝细胞在缺氧缺氧-复氧处理后的生长、凋亡和代谢状态。由于异丙肾上腺素具有β-肾上腺素能受体激动作用，因此本研究推测其可能通过对由于缺氧而导致关键信号途径的改变（如HIF-1α）来发挥保护作用。
在本研究中，加入阿司匹林后使异丙肾上腺素治疗的保护作用更为明显。这表明肝细胞通过各个途径参与异丙肾上腺素与缺氧状态下介导的信号传导过程，并表明异丙肾上腺素在调节血栓素A2（TXA2）水平方面发挥了重要作用。
结论
本研究结果表明，异丙肾上腺素可以通过降低肝细胞凋亡率、增加肝细胞代谢活性来缓解肝脏缺氧复氧损伤，预防肝脏损伤。同时，异丙肾上腺素与阿司匹林的联用可能具有更为显著的保护作用。但是，本研究的样本容量较小，实验的检测指标也有待优化，后续研究还需要进一步探讨异丙肾上腺素在肝脏缺氧复氧保护中的作用机制。