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异丙肾上腺素对大鼠原代肝细胞缺氧复氧的影响的任务书
任务书：异丙肾上腺素对大鼠原代肝细胞缺氧复氧的影响
背景：
缺氧、缺血再灌注等因素常见于心脑血管疾病、外伤等情况下，会导致细胞缺氧、信号转导异常等一系列生理学和生化学改变。在这些环境中，细胞会响应并适应环境，其中儿茶酚胺类能激素具有重要作用。之前的研究结果表明，异丙肾上腺素（Isoproterenol，ISO）在胰岛素抵抗和血糖调节方面发挥重要的作用。
本次研究旨在探究ISO在缺氧复氧环境下对大鼠原代肝细胞的影响，为心脑血管疾病的诊断与治疗提供新的理论依据。
目的：
本次研究旨在探究ISO对大鼠原代肝细胞在缺氧复氧环境下的影响，具体目的如下：
1.探究ISO对大鼠原代肝细胞的细胞存活率、细胞凋亡率及细胞周期的影响；
2.探究ISO对大鼠原代肝细胞ATP含量的影响；
3.探究ISO对大鼠原代肝细胞炎症反应的调节作用。
研究方法：
1.动物模型建立
选取健康雄性SD大鼠（体重200-250g）25只，放入大鼠舒适的环境中，适应环境1个星期。
2.细胞培养
取肝脏组织，切割成小碎片，用消化液（包括0.1%胰酶和0.1%胆汁酸）消化，分离获得原代肝细胞，以10%FBS的DMEM培养基培养。
3.缺氧模型制备
培养的原代肝细胞，进行缺氧处理。在含5%CO2的培养室中，用三个硅胶片将细胞培养皿隔断，加入锥形管，加上培养基，放入无氧培养箱中，细胞进行缺氧处理。用1%O2＋5%CO2＋94%N2的混合气体气体保持无氧处理30分钟。
4.缺氧复氧模型制备
将缺氧细胞处理4h后，加入不含直接暴露到室温下的含5%CO2的新培养基中，以进行复氧处理。
5.对照组与实验组设置
将大鼠肝脏原代细胞分为对照组、ISO实验组，并每组设置4个有缺氧处理和货复氧处理的细胞培养皿。
6.实验组处理
ISO实验组细胞培养液加入ISO药物，浓度100μM，进行缺氧处理和复氧处理，每次缺氧处理和复氧处理时间均为4小时。
7.实验指标检测
检测原代肝细胞存活率、细胞凋亡率、细胞周期及ATP含量，并检测炎症反应相关指标（如IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、NLRP3）的表达水平。
预期结果：
本次研究探究ISO对大鼠原代肝细胞缺氧复氧环境下的影响。预期结果如下：
1.ISO能提高大鼠原代肝细胞缺氧复氧后的存活率和侵袭能力；
2.ISO能抑制大鼠原代肝细胞凋亡率和ATP含量的下降；
3.ISO能抑制缺氧复氧后原代肝细胞中的炎症反应，减少相关炎症松弛因子的表达水平。
参考文献：
1.KimMH,KimHM,KangMJ,etal.Invitroimmunomodulatoryeffectofcatecholaminesonthemurinespleenandperitonealmacrophages.MolecularandCellularToxicology,2019,15(2):193-202.
2.MaZ,ZhangX,LiuX,etal.IsoproterenolInhibitsNLRP3InflammasomeActivationandAttenuatesHippocampalCellularPyroptosisinAcuteElectroconvulsiveTherapy.FrontiersinPsychiatry,2020,11:555016.