丙戊酸钠对人结肠癌细胞HT--29自噬的影响及其机制研究.docx

丙戊酸钠对人结肠癌细胞HT--29自噬的影响及其机制研究
摘要：
丙戊酸钠具有抗肿瘤作用，其机制涉及细胞凋亡、细胞周期、自噬等多个方面。本研究以人结肠癌细胞HT-29为研究对象，研究丙戊酸钠对HT-29细胞自噬的影响及其机制。实验结果表明，丙戊酸钠能够显著抑制HT-29细胞的生长，并且可以诱导HT-29细胞自噬。同时，丙戊酸钠能够上调Bax、下调Bcl-2，促进细胞凋亡，通过抑制mTORC1和激活AMPK信号通路来诱导HT-29细胞自噬。因此，丙戊酸钠对HT-29细胞的增殖、凋亡和自噬三者间存在着复杂的相互作用，这一结果为丙戊酸钠应用于结肠癌的治疗提供了新的机制解释。
关键词：
丙戊酸钠；HT-29；自噬；mTORC1；AMPK
Abstract:
Sodiumbutyratehasanti-tumoreffects,whichinvolvemultipleaspectssuchascellapoptosis,cellcycle,andautophagy.ThisstudyfocusedontheeffectsofsodiumbutyrateonautophagyanditsmechanisminhumancoloncancercellsHT-29.TheresultsshowedthatsodiumbutyratesignificantlyinhibitedthegrowthofHT-29cellsandinducedautophagy.Meanwhile,sodiumbutyrateup-regulatedBaxanddown-regulatedBcl-2topromotecellapoptosis,andinducedHT-29cellautophagybyinhibitingmTORC1andactivatingtheAMPKsignalingpathway.Therefore,thereexistsacomplexinterplaybetweentheproliferation,apoptosisandautophagyofHT-29cellsunderthetreatmentofsodiumbutyrate.Thisstudyprovidesanewmechanismfortheapplicationofsodiumbutyrateinthetreatmentofcoloncancer.
Keywords:
Sodiumbutyrate;HT-29;Autophagy;mTORC1;AMPK
结肠癌是人类常见的消化系统恶性肿瘤之一，发病率和死亡率均较高，其致病原因复杂。丙戊酸钠（Sodiumbutyrate，SB）是一种短链脂肪酸，它是结肠道菌群的代谢产物，也是人类乳汁和血液中存在的一种物质。临床上，SB被广泛应用于肠道疾病的治疗，同时也具有抗肿瘤作用。
自噬是细胞在应激情况下通过化解和分解不需要的或因应激而受损的蛋白质和细胞器的过程，可以从而调节细胞代谢平衡、维持细胞内环境稳定。在肿瘤治疗中，自噬不仅参与了SB的抗肿瘤效应，而且也成为肿瘤细胞对疗效的反作用的一个重要调节机制。因此，本研究将SB作为研究对象，探究其对结肠癌细胞HT-29的自噬影响及其机制。
材料和方法
材料：
人结肠癌细胞HT-29、DMEM培养基、FBS、PBS、PVDF膜、RIPAlysis缓冲液、PMSF、BCA蛋白定量试剂盒、β-actin抗体、LC3抗体、Bax抗体、Bcl-2抗体、RabbitIgG、MouseIgG、DMSO、SB
方法：
1.HT-29细胞分为对照组和实验组，对照组细胞加入相同的DMSO，实验组细胞加入50μMSB。
2.采用MTT法检测不同时间点（24、48、72h）HT-29细胞的增殖情况。
3.采用Westernblot法检测不同时间点（24、48、72h）HT-29细胞中Bax和Bcl-2的表达情况，LC3I/II的转换和AMPK、mTORC1信号通路的变化情况。
4.采用Immunofluorescence法检测对照组和实验组细胞中LC3II-WI转换的比例。
结果
SB抑制HT-29细胞增殖
采用MTT法检测HT-29细胞的生长情况，结果显示，SB能够显著地抑制HT-29细胞的增殖，而且该抑制的效应且随着时间的增加而增强（如图1）。
图1.SB对HT-29细胞增殖的影响。
SB诱导HT-29中的自噬
Westernblot分析结果显示，SB能够诱导HT-29细胞的自噬，随着处理时间的增加，LC3-I向LC3-II的转化逐渐加强，相对的p62的表达水平下调（如图2）。
图2.SB诱导HT-29细胞自噬的影响。
SB通过调节mTORC1和AMPK信号通路诱导HT-29细胞的自噬
Westernblot分析结果