医学专题—电泳技术.ppt

电泳技术
(ElectrophoresisTechnology)一、电泳(diànyǒnɡ)的概念
COO-COO-COOH
╱+H+╱+H+╱
Pr←————→Pr←————→Pr
╲+OH-╲+OH-╲
NH2NH3+NH3+

PH>PIPH=PIPH<PI而核酸，无论是RNA还是(háishi)DNA，由于含有丰富的磷酸基团，所以在PH>4.0时，带净的负电荷。2、带电颗粒在电场作用下所受的力：
(Chargedparticlesundertheactionofelectricfieldforce)F=Ff3.影响(yǐngxiǎng)电泳速度的因素：(Theinfluencingfactorsofelectrophoresisrate)三、电泳装置Electrophoresisapparatus电源(diànyuán)(powersupply)按支持介质种类不同分为：

惰性介质(Inertmedium)：起支持作用，减少(jiǎnshǎo)对流，介质本身不参与电泳分离
纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、硅胶电泳、氢氧化铝电泳
凝胶介质(Thegelmedium)：起支持作用，减少对流，介质本身参与电泳分离琼脂糖凝胶电泳、淀粉凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.按支持介质形状不同分为:
薄层电泳、板电泳、柱电泳
3.按电泳槽方向不同分为：
水平电泳、垂直电泳

4.按用途不同分为：
分析电泳、制备电泳

5.按所用(suǒyònɡ)电压不同分为：
低压电泳（100V～500V）、高压电泳（1000V～5000V）

6.按分离原理不同分为：
移动界面电泳（自由界面电泳）、区带电泳、等速电泳、
等电聚焦电泳、免疫电泳
7.按样品(yàngpǐn)是否经过还原剂处理分为：
还原电泳、非还原电泳

8.按凝胶介质中是否加入变性剂分为：
变性电泳、非变性电泳

9.按电泳系统的均一性分为：
连续电泳、不连续电泳

10.按样品被分离时凝胶介质的pH不同分为：
酸性电泳（pH=4.3）、碱性电泳（pH=8.8）琼脂糖凝胶电泳
(AgarosegelelectrophorsisofDNA)一、琼脂糖凝胶电泳的特点(tèdiǎn)(Thecharacteristicsoftheagarosegelelectrophoresis)分子筛效应（Molecularsieveeffect）：分子量或分子大小和形状不同的带电(dàidiàn)颗粒通过一定孔径的凝胶时，因受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。分子量小，阻力小，移动快；分子量大，阻力大，移动慢。

电荷效应（Chargeeffect）：带电颗粒由于所带电荷量不同，而在电泳中表现出不同的迁移率，这就是电荷效应。第十六页，共三十八页。EB显带（EBbanding）琼脂糖凝胶电泳由于其所分级分离的生物大分
子比聚丙烯酰胺凝胶电泳大，因此适合于分离核酸(hésuān)
（DNA和RNA）和蛋白。
聚丙烯酰胺凝胶电泳
(Polyacrylamidegelelectrophorsis,PAGE)聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(简称Bis)在加速剂N，N，N，N-四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)或核黄素(VB2)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。该凝胶具有刚性的凝胶孔，凝胶孔径的大小(dàxiǎo)主要决定于丙烯酰胺的浓度。
聚丙烯酰胺凝胶具有如下优点(theadvantagesofpolypropyleneethyleneaminesgel)：

一定浓度下，凝胶透明，有弹性，机械性能好
化学惰性好，在范围较大(jiàodà)的pH、温度和离子强度等条件下稳定；几乎无电渗作用
由于可以制得高纯度的单体原料，样品分离重复性较好
样品在凝胶中不易扩散，样品分离灵敏度高，可达10－6g
容易制备出孔径范围很宽的凝胶，以适应不同的需要
无紫外吸收，不染色就可以用于紫外波长的凝胶扫描作定量分析
凝胶浓度的选择(xuǎnzé)与被分离物质分子量密切相关
(Gelconcentrationselectionandseparationmaterialmolecularweight)
第二十三页，共三十八页。第二十四页，共三十八页。二、电泳(diànyǒnɡ)的原理分子筛效应(Effectofmolecularsieve)：分子量或分子大小和形状(xíngzhuàn)不同的带电颗粒通过一定孔径的凝胶时，因受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。分子量小，阻力小，移动快；分子量大，阻力大，移动慢。

电荷效应(Effectofelectriccharge)：带电颗粒由于所带电荷量不同，而在电泳中表现出不