最新精编医学专题—电泳技术-昆明医科大学.ppt

电泳技术(ElectrophoresisTechnology)一、电泳(diànyǒnɡ)的概念COO-COO-COOH╱+H+╱+H+╱Pr←————→Pr←————→Pr╲+OH-╲+OH-╲NH2NH3+NH3+PH>PIPH=PIPH<PI而核酸无论是RNA还是(háishi)DNA由于含有丰富的磷酸基团所以在PH>4.0时带净的负电荷。2、带电颗粒在电场作用下所受的力：(Chargedparticlesundertheactionofelectricfieldforce)F=Ff3.影响(yǐngxiǎng)电泳速度的因素：(Theinfluencingfactorsofelectrophoresisrate)三、电泳装置Electrophoresisapparatus电源(diànyuán)(powersupply)按支持介质种类不同分为：惰性介质(Inertmedium)：起支持作用减少(jiǎnshǎo)对流介质本身不参与电泳分离纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、硅胶电泳、氢氧化铝电泳凝胶介质(Thegelmedium)：起支持作用减少对流介质本身参与电泳分离琼脂糖凝胶电泳、淀粉凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳2.按支持介质形状不同分为:薄层电泳、板电泳、柱电泳3.按电泳槽方向不同分为：水平电泳、垂直电泳4.按用途不同分为：分析电泳、制备电泳5.按所用(suǒyònɡ)电压不同分为：低压电泳（100V～500V）、高压电泳（1000V～5000V）6.按分离原理不同分为：移动界面电泳（自由界面电泳）、区带电泳、等速电泳、等电聚焦电泳、免疫电泳7.按样品(yàngpǐn)是否经过还原剂处理分为：还原电泳、非还原电泳8.按凝胶介质中是否加入变性剂分为：变性电泳、非变性电泳9.按电泳系统的均一性分为：连续电泳、不连续电泳10.按样品被分离时凝胶介质的pH不同分为：酸性电泳（pH=4.3）、碱性电泳（pH=8.8）琼脂糖凝胶电泳(AgarosegelelectrophorsisofDNA)一、琼脂糖凝胶电泳的特点(tèdiǎn)(Thecharacteristicsoftheagarosegelelectrophoresis)分子筛效应（Molecularsieveeffect）：分子量或分子大小和形状不同的带电(dàidiàn)颗粒通过一定孔径的凝胶时因受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率这就是分子筛效应。分子量小阻力小移动快；分子量大阻力大移动慢。电荷效应（Chargeeffect）：带电颗粒由于所带电荷量不同而在电泳中表现出不同的迁移率这就是电荷效应。第十六页共三十八页。EB显带（EBbanding）琼脂糖凝胶电泳由于其所分级分离的生物大分子比聚丙烯酰胺凝胶电泳大因此适合于分离核酸(hésuān)（DNA和RNA）和蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PolyacrylamidegelelectrophorsisPAGE)聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂NN-甲叉双丙烯酰胺(简称Bis)在加速剂NNNN-四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)或核黄素(VB2)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。该凝胶具有刚性的凝胶孔凝胶孔径的大小(dàxiǎo)主要决定于丙烯酰胺的浓度。聚丙烯酰胺凝胶具有如下优点(theadvantagesofpolypropyleneethyleneaminesgel)：一定浓度下凝胶透明有弹性机械性能好化学惰性好在范围较大(jiàodà)的pH、温度和离子强度等条件下稳定；几乎无电渗作用由于可以制得高纯度的单体原料样品分离重复性较好样品在凝胶中不易扩散样品分离灵敏度高可达10－6g容易制备出孔径范围很宽的凝胶以适应不同的需要无紫外吸收不染色就可以用于紫外波长的凝胶扫描作定量分析凝胶浓度的选择(xuǎnzé)与被分离物质分子量密切相关(Gelconcentrationselectionandseparationmate