转基因动物及克隆动物ppt课件.ppt

转基因动物及克隆动物TransgenicAnimalandClonalAnimal内容第一部分转基因动物1982年Palmiter-“超级巨鼠”华盛顿大学的Palmiter将大鼠的生长激素基因注射到小鼠受精卵内,培育出体型明显大于正常小鼠的超级鼠,成果轰动一时。转基因小鼠A生长速度要比普通小鼠B的生长速度平均快50%。1987年世界上第一只商业化转基因绵羊诞生(Roslin研究所)
1989年精子载体法应用于转基因动物
1997年转基因克隆动物(Roslin研究所)
转基因克隆羊Polly:携带有人凝血
因子Ⅸ
1999年上海遗传研究所宣布转基因试管牛“滔滔”诞生
三十几年里，转基因动物技术飞速
发展，转基因兔、转基因猪、转基
因牛、转基因鸡、转基因鱼等陆续
育成。转基因动物技术已广泛应用
于生物学、医学、药学、畜牧学等
研究领域
转基因鼠全球首只转基因猴“Andy”转基因鱼转基因试管牛“滔滔”英国1990－2000年科研中使用转基因动物的比例图三十年来，转基因动物经历了
兴起——高潮——现在相对平稳的过程。
其重要意义在于人为实现动物物种之间，甚至动物与植物、微生物之间遗传物质的交换与重组。
如：改变动物性状
导入抗病基因二、转基因动物的概念三、转基因动物培育原理四、方法精子载体法（一）显微注射法
（以培育转基因小鼠为例）1.方法
显微注射制作转基因动物流程图2.具体步骤显微注射仪拉针仪（2）受精卵的采集受精卵的采集受精卵的消化、培养注射前（4）受精卵的移植受精卵的移植（5）得到founder转基因小鼠（6）对founder转基因小鼠进行鉴定、筛选、杂交获得纯合转基因小鼠（二）逆转录病毒法关于逆转录病毒原理关键步骤（2）包装细胞
决定着重组病毒效价及其宿主范围。常用φ-2细胞株
（3）重组逆转录病毒感染早期胚胎
载体转染包装细胞后与8细胞胚胎共培养进行转染
（4）胚胎移植
（5）建系（三）胚胎干细胞介导法
（ES细胞法）关于ES细胞原理关键步骤三种转基因方法优缺点比较优点：
1、整合率相对较高
2、可导入基因片断较长
3、外源基因整合于所有的组织细胞中的概率高

缺点：
1、整合率随机
2、有些动物原核看不清，需经特殊处理才能有效导入
3、需较精密仪器，费用昂贵优点：
1、胚胎存活率高
2、病毒DNA随机单拷贝整合
3、宿主范围广

缺点：
1、整合率不高，整合位点是随机的
2、后代多为嵌合体动物
3、外源基因易发生重排或丢失
4、病毒载体容量不大
5、病毒DNA序列可能会干扰外源基因的表达优点：
1、整合率可控
2、可用多种方法将外源基因导入ES细胞，其细胞的鉴定和筛选比较方便
3、ES细胞注入囊胚及囊胚移植到子宫，操作比较简便

缺点：
1、ES细胞系培养、保存和维持不易
2、后代多为嵌合体
3、所需时间较长五、转基因关键技术六、应用价值1、研究基因的结构和功能及其表达与调控2、动物疾病模型HBV转基因动物树鼩3.基因治疗（genetherapy）4、研制生物反应器优势用动物乳腺表达外源基因的主要种类

产品类别举例
血液产品第8因子、第9因子、C蛋白、凝血酶III、
抗胰蛋白酶、血纤蛋白原
抗体单克隆抗体
药物干扰素、人生长激素、tPA、EPO
疫苗Malaria
组织维生物Collagen
营养药乳白蛋白、乳铁蛋白、溶菌酶、人源化牛奶
工业蛋白质蜘蛛网蛋白、贝类分泌的黏蛋白
我国乳腺生物反应器研究情况

目的基因名称产品的主要功能承担单位
人血清白蛋白血液溶胀剂中国农业大学
人干扰素抗病毒因子中国农业大学
鸡法氏囊病毒VP鸡疫苗中国农业大学
第九因子血友病治疗上海儿童医院
EPO细胞因子上海儿童医院
人胰岛素原糖尿病治疗新疆牧科院
TPA治疗血栓军事医学科学院
人生长激素生长激素不足扬州大学现状难点携带人血清白蛋白基因的转基因牛“滔滔”五、异种移植英国：将人的CD55、CD59转入猪中，在
仔猪血管内皮细胞表达CD55、CD59。
将此转基因猪的心脏移植给猴，存活
了10天。
同济：将人的DFA转入猪中，此转基因猪
的心脏在猴体内存活了90小时六、品种改良生长激素基因转基因猪：
生长速度提高了10~15%
饲料报酬和瘦肉率提高了10%
主要问题：
该转基因猪传了7代，仍未生产出纯合的转基因家系。七、主要设备显微操作仪拉针仪电融合仪电极杯CO2培养箱体视显微镜评述第二部分克隆动物克隆（Clone）动物克隆方法一、胚胎分割法（一）胚胎细胞核移植2、操作程序
(1)卵母细胞去核：吸管吸除法
紫外线照射法
(2)核供体的准备和移植:单个卵裂球
(3)卵裂球与卵子的融合:电融合法
(4)卵子的激活：电脉冲法
(5)克隆胚胎的培养和移植3、存在问题

效率太低：
克隆胚胎的成活率只有10％～20％，成本太高（二）体细胞核移植Wi