转基因动物技术ppt课件.ppt

TransgenicTechnologyDefinition

TransgenictechnologyreferstothegeneticengineeringofanorganismsothatitsgenomicDNAisalteredtoover-orunderexpresscertaingenes.Transgenictechnique
GeneKnockOut
GeneKnockIn
GeneKnockDown
GeneTrapping

mouse,rabbit,rat,sheep,pig,cawetc.The2007NobelPrizeinphysiologyormedicineisawardedfortheirdiscoveriesofprinciplesforintroducingspecificgenemodificationsinmicebytheuseofembryonicstemcells.

Evans’swork:TheEScells MarioCapecchiandOliverSmithies,independentlyofeachother,discoveredhowhomologousrecombinationbetweensegmentsofDNAmoleculescanbeusedtotargetgenesinthemammaliangenomeanddevelopedmethodstogenerategeneticallymodifiedmice.http://www.genetargeting.com/定点突变技术分子开关--Cre/Loxp系统Cre-LoxP系统的特性两个loxp位点的方向相反Knock-outgene
Knock-outstopcassette

Knock-outlabelFLP/frt重组系统时间控制和组织特异性表达LSL-Cre:loxp-stop-loxp,Cre
FSF-Flpo:FRT-stop-FRT,Flpo
EstablishedLungTumorsHSV-tk：单纯疱疹病毒胸苷激酶，自杀基因
HSV－tk基因的产物使细胞能利用培养基中的GANC(Gancyclovir，丙氧鸟苷）而死亡
例如将在肝癌细胞中可表达AF基因的调控区与水痘一带状疮疹病毒中的胸苷激酶（VZV-TK）基因进行重组，构建逆转录病毒载体导入体内，TK基因只在肝癌细胞中表达，产生的TK可催化6-甲基嘌呤阿拉伯糖核苷磷酸化产生araAMP，进一步磷酸化形成细胞毒物质araATP，杀死肝癌细胞。Neo基因
卡那霉素抗性基因编码的是新霉素磷酸转移酶II，基因记做neo，能通过降解G418、新霉素和卡那霉素来实现真核和原核细胞的相应抗性。
一般应用于原核生物就是卡那霉素抗性基因,应用于真核生物就是G418抗性。

外源基因导入ES细胞的方法有:
1.电穿孔法
2.逆转录病毒载体法
3.脂质体包装法
4.磷酸钙沉淀法三、囊胚注射和杂交筛选小鼠基因型的鉴定？129和C57BL/6纯系小鼠
近交系InbredMice表1.用基因打靶法制备的一系列重要的基因敲除小鼠及表型：

敲除基因表现型
RAG-1和/或RAG-2因无TcR基因重排而无T细胞
TcRβ双阴性胸腺细胞聚集，双阳性胸腺细胞很少，TcRα正常重排
TcRα有双阴和双阳T细胞而无单阳性T细胞
P56lckT细胞发育在早期双阳性成熟期受阻，无δT细胞
CD3-ζT细胞发育在早期双阳性成熟期受阻
CD45T细胞发育在双阳性成熟期受阻
MHC-Ⅱ,不变链无CD4+T细胞，CD4+CD8-/+很少，正常NK，1.1+CD4+,CD8+正常
CD4CD8+数量和功能正常
MHC-Ⅰ，β－2微球蛋白无CD8+T细胞，CD4+T细胞正常
TAP1/TAP2
TcR-δ无δT细胞，对结核杆菌易感性增加
P59fynT细胞发育正常，T细胞应答缺损
IgM穿膜区晚期CD43+B聚集，无等位基因排斥
Λ5CD43+细胞聚集，部分成熟B细胞出现延迟
IL－2IgG1,IgG2a，IgG2b自身抗体增加
CD40L高IgM,无生发中心，低IL－12和IFNγ，巨噬细胞活化受阻
CD28IgG1，IgG2b减少转基因动物的维持胚胎的冷冻保存国家遗传工程小鼠资源库TheJacksonLaboratory
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