土壤中分解尿素的细菌的分离与计数定稿.ppt

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、课题背景硝化细菌是指能够氧化无机氮化物,从中获取能量,从而把二氧化碳合成为有机物的一类细菌。硝化细菌合成有机物的过程表示如下：2NH3+3O2→(硝化细菌)2HNO2+2H2O+能量2HNO2+O2→(硝化细菌)2HNO3+能量6CO2+6H2O→(能量)C6H12O61、实验室中微生物的筛选原理：15.0g②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？1、显微镜直接计数：显微镜直接计数法其原理与计数板的构造有关每块计数板上有两个计数室（正方形），盖上盖玻片后容积是一定的（0.1mm3），深为0.1mm，边长为1mm，其上面有精确的刻度。其刻度一般有两种规格我们采用的是25×16的，计数时查5个小方格的总菌数。如图：计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×16×1000×B=50,000A×B个每毫升原液所含细菌总数取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖盖玻片。取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。用10×物镜观察并将计数室移至视野中央。在10×物镜下计数：计数4个（或5个）小格的菌体总数，然后求得平均值。乘上400就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。注意事项：计上不计下，计左不计右。不能区分死菌与活菌；2.间接计数法（活菌计数法）⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。⑵常用方法：计算公式：注意事项①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。②为使结果接近真实值，更具说服力，可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板，培养后计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。（为什么）例2、自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题：步骤如下：a、制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液；b、为了得到更加准确的结果，应选用法接种样品；c、适宜温度下培养。结果分析：（1）测定大肠杆菌菌落数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，与事实更加接近的是（）A、一个平板，统计的菌落数时230个B、两个平板，统计的菌落数分别为220和260，取平均值为240C、三个平板，统计的菌落数分别为21、212和256，取平均值为163D、四个平板，统计的菌落数分别为210、260、240和250，取平均值为240（2）某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上菌落数的平均值为212，那么每毫升样品中的菌落数约是（涂布平板时所用的稀释液体积为0.2mL）个。（3）用这种方法测定菌体密度时，实际活菌数量要比测得的数量（多/少），因为。例：在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中，需利用计数板对微生物细胞进行直接计数。计数板是一个特制的可在显微镜下观察的玻片，样品就滴在计数室内。计数室由25×16＝400个小室组成，容纳液体总体积为0.1mm3。某同学操作时将1mL酵母菌样品加99mL无菌水稀释，用无菌吸管吸取少许使其自行渗入计数室，盖上盖玻片并用滤纸吸去多余菌液，进行观察计数。(1)在实验中，某同学的部分实验操作过程是这样的：①从静置试管中吸取酵母菌培养液加入计数板进行计数，并记录数据；②把酵母菌培养液放置在冰箱中；③第七天再取样计数，记录数据，统计分析绘成曲线。请纠正该同学实验操作中的3处错误：①________________________________________________；②________________________________________________；③________________________________________________。(2)在实验前应该对计数板、吸管等器具进行处理。(3)如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应采取的措施是。(4)如果观察到如图所示a、b、c、d、e5个大格共80个小室内共有酵母菌48个，则上述1mL酵母菌样品中约有酵母菌个；要获得较为准确的数值，减少误差，你认为该怎么做？。设置对照的主要目的是：实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。二.实验的具体操作㈠.土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。◆取土样用的小铁铲和盛