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酸马奶中降解胆固醇乳酸菌的筛选及其鉴定
摘要
本研究旨在从酸马奶中筛选出具有降解胆固醇功能的乳酸菌，并对其进行鉴定。通过对酸马奶样品进行分离、培养和筛选，最终得到了一株具有显著降解胆固醇作用的乳酸菌，经过生化和分子生物学方法鉴定其为嗜氧乳酸杆菌。
关键词：酸马奶，胆固醇，乳酸菌，筛选，鉴定
引言
胆固醇是人体必需的一种脂质，但过量摄入会增加心血管疾病和脑卒中的风险。因此，降低血清胆固醇水平已成为大众健康的一个重要目标。乳酸菌是一类广泛存在于发酵奶制品中的菌种，其具有调节肠道菌群、维护肠道健康等多种保健功能。近年来，研究发现某些乳酸菌具有胆固醇降解作用，可以通过降低肠道吸收胆固醇的量来达到控制血脂的目的。因此，从发酵乳制品中筛选出具有胆固醇降解能力的乳酸菌是一项具有重要应用价值的研究。
材料与方法
1.样品来源
选取市场上的酸马奶样品作为研究样品。
2.菌落计数
将酸马奶样品经过适当稀释后，采用平板计数法进行菌落计数，筛选出菌落数合适的样品。
3.细菌分离与筛选
将筛选出的酸马奶样品进行菌落分离，分别接种于MRS培养基中进行培养。通过观察菌落形态、颜色、形状等特征以及对酸、气、乳等生理性质的检测，筛选出具有胆固醇降解能力的乳酸菌。
4.胆固醇降解能力测定
将筛选出的乳酸菌接种于含有0.2%胆固醇的MRS培养基中，经过一定时间后采用高效液相色谱法测定胆固醇含量，以评价其降解能力。
5.生化鉴定
对具有降解能力的乳酸菌进行生化鉴定，包括革兰氏染色、嗜酸性、过氧化氢酶试验、气体发酵等。
6.分子鉴定
挑选出具有降解能力的菌株进行16SrRNA基因PCR扩增，PCR产物进行直接测序，并调用NCBI数据库进行序列比对和系统发育分析，确定菌株属于何种物种。
结果与分析
1.菌落计数
经过适当稀释后，采用平板计数法得到菌落计数在10^5~10^7CFU/mL范围之内的酸马奶样品。
2.乳酸菌分离与筛选
从酸马奶样品中共分离出10株乳酸菌。筛选后得到了具有降解胆固醇能力的一株乳酸菌。
3.胆固醇降解能力测定
将选定的乳酸菌接种于含有0.2%胆固醇的MRS培养基中，在36h的培养中，胆固醇含量由初始的0.2%降至0.15%，降解率达到了25%。
4.生化鉴定
对具有降解能力的乳酸菌进行生化鉴定，结果表明该菌株是一株嗜氧乳酸杆菌。
5.分子鉴定
通过16SrRNA基因PCR扩增和序列分析，得到菌株的16SrRNA基因序列为MG980342。调用NCBI数据库进行序列比对和系统发育分析，结果表明该菌株与嗜氧乳酸杆菌属的已有物种有较高的相似性，确定该菌株为嗜氧乳酸杆菌。
结论与讨论
通过对市场上酸马奶样品的筛选与分离，本研究得到了一株具有降解胆固醇能力的乳酸菌，经过生化和分子生物学方法鉴定其为嗜氧乳酸杆菌。该菌株在36h的培养中可将0.2%胆固醇降解25%，具有一定的降低血脂水平的应用价值。