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脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)的检测与控制概述1998年美国国家食品生产者联盟(NFPA)经过调查发现,美国35%的果汁腐败都与嗜酸的芽胞杆菌有关。 嗜酸耐热菌的在芽孢可橙汁中萌发、生长,也可以在30℃的苹果汁、葡萄汁中生长良好。 导致果汁产品腐败的嗜酸耐热菌主要是酸土脂环酸杆菌。引起的果汁腐败变质的主要是它的代谢产物。2000年起,美国及欧洲大部分果汁消费国要求浓缩果汁中脂环酸芽胞杆菌的含量应<1CFU/10mL。 2002年起,浓缩果汁中对耐热嗜酸菌的要求为不得检出。 脂环酸芽胞杆菌引起腐败的初期不易发现,产品并不出现明显的涨包或酸败。 因而在低污染时难以检出,但其代谢产物达到万亿分之一的浓度时,就会使果汁口感风味变劣、浊度升高乃至在包装底部形成白色的沉淀等质量危害。 其芽胞还可污染生产中的半成品(浓缩果汁)、生产材料(加工水果)、生产设备。Walls等人对酸土环脂芽孢杆菌的致病性进行了研究,他们将含有高浓度酸土脂环酸芽孢杆菌的生理盐水悬菌液0.5ml注射到小鼠腹膜内,小鼠未表现出任何异常现象,证明在受试浓度内该菌不具致病性。用含菌5×106CFU/ml的苹果汁饲喂豚鼠,一周后豚鼠仍表现正常。至今未见关于饮用了含脂环酸芽孢杆菌的果汁后导致疾病的病例报道。 小结:脂环酸芽胞杆菌虽然可引起饮料变质,但目前未发现其对人致病。愈创木酚 愈创木酚,又称邻甲氧基苯酚、2-甲氧基苯酚。是用于食品的合成调味料,它可以产生甜、烟熏和烧烤风味。 卤酚 溴酚:包括2,6-二溴苯酚(2,6- DBP)和2,6-二氯苯酚(2,6-DCP),可产生“药味”、“消毒水味”。 脂环酸芽胞杆菌的分类与命名1984年Cerny等在腐败的苹果汁中分离到一株细胞膜中含ω-环己烷脂肪酸结构的芽孢杆菌,高度怀疑该菌导致了苹果汁的腐败。 1987年Deinhard等对包括前述菌株的13株耐热耐酸菌做了结构分析和全面的鉴定。将其中一株与B.acidocaldarius相似的菌株命名为酸土环脂芽胞杆菌(B.acidoterrestris)。 1992年Wistozkey等对这些菌株进行了16SrDNA序列分析将这三株菌从芽孢杆菌属中划分出来,命名为脂环酸芽孢杆菌属(Alicyclobacillus)。 Churey等人1994年从腐败的苹果汁中发现嗜酸耐热芽胞菌,经鉴定为酸土脂环芽胞杆菌。 Splittstoesser等人从腐败的无菌包橙汁中发现2株嗜酸耐热芽胞菌,革兰染色阳性,芽孢耐热性D90℃为16~23min,D95℃为2.4~2.8min。 脂环酸芽胞杆菌的模式株:A.acidoterrestris酸土环脂芽胞杆菌。 1998~2003年,不断有人从南极、亚速尔群岛、日本仙台火山附近的土壤中分离到这类细菌。 至此脂环酸芽胞杆菌属有11个种,1个亚种。该菌属新菌种的发现仍在继续。 脂环酸芽胞杆菌的生化特性菌落形态一般为圆形饱满、乳白色、半透明或不透明,直径为0.5~5mm。 菌体形态为杆状,革兰染色阳性,产芽孢,芽孢呈椭圆形,端生或次端生,有时会使菌体细胞膨大,菌体宽0.35~1.1μm、长2~6.3μm。 好气生长。对脂环酸芽胞杆菌的生化鉴定常采用API50CHB鉴定系统。 API50CHB鉴定系统采用49种碳源(糖、醇),观察芽胞杆菌对其的利用情况进行编码鉴定。但脂环酸芽胞杆菌的部分菌株之间糖利用情况的差异并不显著,往往需要进一步的鉴定。 酸土环脂芽胞杆菌生化反应目前分离脂环酸芽胞杆菌的常用培养基: BAM(BacteriaAcidocaldariusmedium); OSA(orangeserumagar); PDA(patatodestroseagar),但需调节pH至3.5; YSG(yeaststarchglucose); K氏培养基; SK琼脂培养基等。 脂环酸芽胞杆菌的生长温度、pH范围嗜酸耐热菌在不同果汁中的抗热性研究表明: 培养基中的阳离子(Ca+、Mg2+、Ba2+、Mn2+、Sr2+)对嗜酸耐热菌的抗热性无影响。 有机酸的不同(苹果酸、柠檬酸、酒石酸)对嗜酸耐热菌的抗热性无显著性影响。 在88~91℃范围内,当pH值增加约0.6时,D值增加近1倍 可溶性固形物的含量会影响嗜酸耐热菌抗热性,在同样温度时,D值随可溶性固形物的增加而增加。但当温度接近97℃时,影响不明显。脂环酸芽胞杆菌的分布与污染途径脂环酸芽胞杆菌检验方法介绍K氏培养基的配制: 酵母粉1.25g 蛋白胨2.50g 葡萄糖0.5g 吐温800.5ml 琼脂6.50g 蒸馏水500ml 配制方法:将各成分加入蒸馏水中,溶解后,在121℃灭菌15~25min,冷却至约50℃时用经过滤除菌的12.5%的苹果酸(1.25g苹果酸加入10ml蒸馏水,溶解后以0.45μm滤